[发明专利]高效液相色谱法分析蛹虫草中腺苷和虫草素含量的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

   （1）腺苷和虫草素混合标准溶液制备：称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品置于容器中，用水溶解并定容作为标准储备液，加超纯水将所述标准储备液稀释成若干不同浓度的腺苷和虫草素混合标准溶液；

    蛹虫草子实体供试溶液制备：将蛹虫草子实体烘干，经粉碎机粉碎后过筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草子实体粉末样品，加入提取液进行提取，提取结束后分离得上清液，即为蛹虫草子实体供试溶液；

   （2）测定：分别吸取腺苷和虫草素混合标准溶液及蛹虫草子实体供试溶液，过滤后注入进样小瓶，测定蛹虫草子实体供试溶液应呈现与腺苷和虫草素混合标准溶液色谱保留时间相同的色谱峰。

2.如权利要求1所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述腺苷和虫草素混合标准溶液的制备方法为：精确称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品各4mg，置于50 ml容量瓶中，用50ml水溶解并定容作为标准储备液，浓度记为80μg/ml；

将所述标准储备液用超纯水稀释成2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的腺苷和虫草素混合标准溶液。

3.如权利要求2所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述精确称取为精确到0.0001 g。

4.如权利要求1所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，蛹虫草子实体供试溶液制备为：将蛹虫草子实体置于40℃烘干箱烘干，经粉碎机粉碎后过200目筛，精确称取干燥至恒重的样品0.50 g于50 ml离心管中，加入25 ml提取液后水浴超声提取，提取结束后将离心管置于20℃、5000 r/min的离心机中离心10 min，吸取上清液1 ml，经0.45μm水相微孔滤膜过滤后直接注入进样瓶以供分析。

5.如权利要求1或4所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述步骤（1）蛹虫草子实体供试溶液制备中，所述提取液为纯水。

6.如权利要求1或4所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述步骤（1）蛹虫草子实体供试溶液制备中，所述提取为提取一次，提取时间为30-40分钟，提取温度为30℃。

7.如权利要求4所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述水浴超声提取的超声功率为700W。

8.如权利要求1所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，高效液相色谱条件为：

色谱柱为XBridgeTM C18(5μm, 4.6 × 250 mm)；

流动相为甲醇：水=16:84（v:v）；

流速：1.0 ml/min；

进样量：10μL，自动进样；

柱温：30℃；

检测波长：254 nm。

9.如权利要求8所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述流动相中的水为超纯水。

10.如权利要求1所述的高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述色谱测定过程采用等度洗脱。