[发明专利]一种HPLC法分析分离伊班膦酸钠及杂质的方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种HPLC方法，尤其是一种伊班膦酸钠原料及制剂的分析方法。

背景技术

伊班膦酸钠是防治以破坏细胞性骨吸收的为主的各类代谢性骨病及骨质疏松症的主要药物，其结构式为

伊班膦酸钠

化学名称为1-羟基-3-（N-甲基-戊胺基）-亚丙基二膦酸一钠盐一水合物。在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体或降解产物可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量。而伊班膦酸钠合成过程主要需控制的是中间体杂质I（3-N-甲基-N正戊基胺丙酸）和成品的降解产物杂质II（1-羟基-3-（N-戊胺基）-亚丙基二膦酸），它们的结构式分别为：

杂质I                   杂质II

目前国家药品标准中对伊班膦酸钠产品主要控制的杂质为亚磷酸和游离的磷酸盐，未要求对上述两种杂质进行检测，现有技术中也仅有用薄层色谱法检测杂质II的相关文献，而无使用HPLC检测这两种杂质的相关报道，但采用薄层色谱法存在灵敏度不高和不能对杂质II进行定量测定的缺陷。众所周知，杂质水平是药品安全性和有效性的重要因素之一，因此，本领域需要一种能有效实现伊班膦酸钠与杂质I和杂质II分离的方法。

现有技术中伊班膦酸钠含量的测定方法主要有两种：一是采用衍生后的紫外分光光度法，二是用硝酸钍溶液滴定。但这两种测定方法均存在操作过于繁琐，受干扰因素较多，准确度低的缺点；同时，两种方法均需要大量的样品，大大增加了检测成本。

目前，用于HPLC检测分析的色谱柱按填充剂的类型不同，可分为：C8柱、C18柱、苯基柱、氨基柱、氰基柱、凝胶柱、蛋白柱、纤维柱、离子交换柱等等，用于液相洗脱的流动相也可以是水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或是上述溶液按不同比例组成的混合物，用于HPLC检测相关的检测器有紫外检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、荧光检测器、电导检测器等，而紫外检测器常用的检测波长在190~400nm之间。本发明经反复试验发现，采用以辛烷基或十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇-磷酸盐缓冲液或乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相进行色谱柱分离后，用紫外检测器进行检测，不仅可以有效实现分离杂质I、杂质II，专属性强，同时又可精确测定伊班膦酸钠的含量，准确度高，因此本发明符合这种需求。

发明内容

为克服上述技术缺陷，本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法分析分离伊班膦酸钠及其杂质I和杂质II的方法，不仅能够实现伊班膦酸钠及其杂质的有效分离，而且还能准确测定伊班膦酸钠的含量。该方法采用以辛烷基或十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇-磷酸盐缓冲液或乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相进行色谱柱分离后，用紫外检测器对伊班膦酸钠及其杂质进行检测。

其中，色谱柱规格为150×4.6mm或200×4.6mm或250×4.6mm。

磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L~0.05mol/L，优选0.02mol/L；磷酸盐缓冲液具体指磷酸二氢钾、磷酸二氢钠溶液和磷酸二氢铵溶液中的一种或几种的组合，优选磷酸二氢钾溶液。

流动相中甲醇或乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为6：94~2：98；甲醇或乙腈与磷酸盐缓冲液体积比优选3：97。

紫外检测波长为195nm~205nm，优选195nm或200nm。

流动相流速为0.8~1.2mL/min，优选1.0mL/min。

进一步，本发明所述的分析分离方法，该方法用于伊班膦酸钠杂质的分析分离包括以下4个步骤：

（1）取伊班膦酸钠原料适量，加甲醇-磷酸盐缓冲液或乙腈-磷酸盐缓冲液或水制成每1mL含伊班膦酸钠1mg~4mg的供试品溶液；

（2）精密称取伊班膦酸钠、杂质I、杂质II对照品适量，加甲醇-磷酸盐缓冲液或乙腈-磷酸盐缓冲液或水制成每1mL各含1μg~4μg的溶液作为对照品溶液；

（3）设置流动相流速为0.8~1.2mL/min；检测波长为195nm~205nm；

（4）分别取步骤（1）中供试品溶液、步骤（2）中对照品溶液20-50μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算得伊班膦酸钠杂质I和杂质II的含量。

更进一步，本发明所述的分析分离方法，该方法用于伊班膦酸钠原料中杂质的分析分离包括以下4个步骤：

（1）取伊班膦酸钠原料待测样品适量，加乙腈-磷酸二氢钾溶液制成每1mL中含伊班膦酸钠4mg的溶液作为供试品溶液；