[发明专利]化学发光法直接标记抗原检测丙型肝炎病毒抗原抗体及检测试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及化学发光法直接标记抗原检测丙型肝炎病毒抗原抗体及检测试剂盒，属于化学发光法以及体外诊断检测领域。

背景技术：

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)呈球形，直径小于80nm(在肝细胞中为36～40nm，在血液中为36-62nm)，为单股正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。丙型肝炎病毒可引起丙型肝炎主要经输血，针刺，吸毒等传播。HCV感染通常是持续性的终生感染，抗体检测是一个非常有效的方法。但因感染HCV后，抗HCV出现较慢，一般情况下，抗体的血清学转换可以延迟到暴露后几个月才发生，此时可发生抗HCV的假阴性(也就是说在抗体可检出之前或在血清学转换之中即所谓的“窗口期”)，故在早期诊断丙肝感染上有困难。HCV核心抗原检出时间早于抗体，HCV-cAg检测可作为HCV抗体检测的补充试剂。

目前丙型肝炎的检测方法主要有三类：1.丙型肝炎抗体检测：其缺点是感染丙型肝炎病毒HCV后，有2-26周的潜伏期，一般到抗HCV抗体出现(转阳)有一个较长的窗口期，平均为70d，有的患者窗口期可延长至6-9个月或更长。由于窗口期的存在，对潜伏期和隐形感染者容易造成漏检，机体感染HCV后，在抗HCV抗体出现之前约2周左右，血循环中即可出现病毒颗粒，此时丙型肝炎病毒HCV的RNA经PCR方法检测可为阳性，血液具有感染性，而用抗体检测方法根本无法测出。2.丙型肝炎病毒HCV核酸检测：感染丙型肝炎病毒HCV后1-2周，血清中即可检测到HCV-RNA。因此，HCV核酸检测(HCV RT-PCR检测)可用于丙型肝炎的早期诊断，并且通过对病毒拷贝数的定量检测可对其临床疗效进行监测。因为PCR法检测HCV-RNA影响因素较多，在样本收集、储存和检测方面都有严格的要求，并且PCR的检测操作过程复杂、费时。3.丙型肝炎抗原检测：丙型肝炎病毒HCV核心抗原是由HCV基因中最为保守的部分编码而来，在HCV-RNA出现后的1-2d内即出现丙型肝炎病毒HCV抗原，且与HCV-RNA的水平相平行，可以作为HCV复制的标志。有研究表明，HCV抗原检测与抗HCV抗体检测相比，HCV抗原的检测可使检测的窗口期平均提前49天，缩短窗口期HCV感染者的献血的风险。与RT-PCR方法相比具有操作简便、时间短、对环境要求低的特点，在临床上可用于早期急性丙型肝炎诊断。

发明内容：

本发明的目的是提供一种化学发光法直接标记抗原检测丙型肝炎病毒抗原抗体及检测试剂盒，主要解决现有技术存在的灵敏度低、稳定性差、操作烦琐及污染环境等技术问题。最主要解决的问题是缩短窗口期，可用于早期急性丙型肝炎诊断。

本发明采用化学发光法，直接标记抗原联合检测丙型肝炎病毒抗原抗体。该发明建立双抗夹心的基础之上，在这里，样品中的抗原抗体首先被包被于微孔板上的抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体AbI、丙型肝炎病毒重组抗原AgI捕获。在洗掉样品的其它部分，再加入HRP标记物(HRP标记抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体AbII、丙型肝炎病毒重组抗原AgII)，就可以形成单克隆抗体AbI-丙型肝炎病毒抗原-单克隆抗体AbII HRP标记物复合物与重组抗原AgI-丙型肝炎病毒抗体-重组抗原AgII HRP标记物复合物，洗板加入A液、B液，用化学发光分析仪测量发光值，发光值与样本中抗原抗体总浓度呈正相关，与临界值相比较，从而判断阴阳性。

与现有技术相比，本发明具有以下突出优点：

1.本发明采用丙型肝炎抗原抗体联合检测大大缩短窗口期。现阶段丙型肝炎的检测一般是检测丙型肝炎抗体：其缺点是感染丙型肝炎病毒后，有2-26周的潜伏期，一般到抗HCV抗体出现(转阳)有一个较长的窗口期，平均为70d，有的患者窗口期可延长至6-9个月或更长。由于窗口期的存在，对潜伏期和隐形感染者容易造成漏检。本发明采用丙型肝炎抗原检测，丙型肝炎病毒HCV核心抗原是由HCV基因中最为保守的部分编码而来，在HCV-RNA出现后的1-2d内即出现丙型肝炎病毒HCV抗原，且与HCV-RNA的水平相平行，可以作为HCV复制的标志。有研究表明，HCV抗原检测与抗HCV抗体检测相比，HCV抗原的检测可使检测的窗口期平均提前49天，缩短窗口期HCV感染者的献血的风险。本发明应用联合检测能够将抗原与抗体检测的优势据发挥出来，且本发明具有操作简便、时间短、对环境要求低的特点，在临床上可用于早期急性丙型肝炎诊断。

2.本发明是采用先进的化学发光法。化学发光法灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害。