[发明专利]化学发光法直接标记抗原检测丙型肝炎病毒抗原抗体及检测试剂盒

权利要求书

1.“化学发光法直接标记抗原检测丙型肝炎病毒抗原抗体”，其特征在于如下检测原理：本发明采用化学发光法，联合检测丙型肝炎病毒抗原抗体。该发明建立双抗夹心的基础之上，在这里，样品中的抗原抗体首先被包被于微孔板上的抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体AbI、丙型肝炎病毒重组抗原AgI捕获。在洗掉样品的其它部分，再加入HRP标记物(HRP标记抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体AbII、丙型肝炎病毒重组抗原AgII)，就可以形成单克隆抗体AbI-丙型肝炎病毒抗原-单克隆抗体AbII HRP标记物复合物与重组抗原AgI-丙型肝炎病毒抗体-重组抗原AgII HRP标记物复合物，洗板加入A液、B液，用化学发光分析仪测量发光值，发光值与样本中抗原抗体总浓度呈正相关，与临界值相比较，从而判断阴阳性。

2.化学发光法直接标记抗原检测丙型肝炎病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于包括盒体，设在盒体内的包被板和设在盒体内试剂及不干胶封片和使用说明书。

3.根据权利要求2所述包被板，其特征在于包被板上包被的是抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体与丙型肝炎病毒重组抗原，制备工艺是将包被抗体用包被缓冲液稀释作为包被液，包被反应板，并用封闭液封闭。

4.根据权利要求3所述包被缓冲液，其特征在包括Tris-HCl缓冲液、碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求2所述设在盒体内试剂，其特征在于所述试剂包括：HRP标记物(HRP标记抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体AbII、丙型肝炎病毒重组抗原AgII)、HCV抗原抗体阴性对照品、HCV抗原抗体阳性对照品、A液、B液、20X浓缩洗涤液。

6.根据权利要求5所述HRP标记物，其特征在于制备方法为：取5mg HRP溶于1.0ml NaHCO₃溶液，充分溶解HRP。加入适量0.06M NaIO₄；室温避光搅拌30分钟。移入透析袋，用0.01M，pH9.6碳酸盐缓冲液透析过夜。取纯化标记原料(抗丙型肝炎病毒抗原单克隆抗体AbII、丙型肝炎病毒重组抗原AgII按照质量比为1∶1混合)5mg，用0.011M的NaHCO₃，溶液充分溶解，与酶液混合，装入透析袋，用0.01M，pH9.6碳酸盐缓冲液4℃避光透析24小时，换液4次。取透析后结合液，加入0.2ml 0.4％NaBH₄搅拌30分钟后，4℃放置4小时。将透析液上Sephadex G-200层析柱，用0.01M，PH7.2的PBS洗脱，收集第一个的洗脱峰，-20℃保存备用。