[发明专利]一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法

权利要求书

1.一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述检测方法为1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化高效液相色谱法，其步骤包括：

（1）HPLC色谱条件与系统适应性试验；

（2）单糖组分测定，分别吸取混合对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中分析得到色谱图，并根据各单糖分子量及其衍生物色谱峰面积计算各单糖的摩尔比；所述对照品溶液为D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖、L-岩藻糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖、D-盐酸氨基葡萄糖和L-鼠李糖对照品的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的衍生物溶液；所述供试品溶液为云芝糖肽酸水解产物的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的衍生物溶液。

2.根据权利要求1所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相是乙腈-磷酸缓冲液，其中乙腈的体积百分比为16-20％，磷酸缓冲液的浓度为0.01-0.1mol/L，pH值为6.8-7.2；紫外检测器检测波长为250-260nm，理论塔板数按葡萄糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生物计算不得低于2000。

3.根据权利要求2所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述磷酸缓冲液的浓度为0.03-0.07mol/L，PH值为6.9-7.1。

4.根据权利要求1所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中混合对照品溶液的制备方法是，将D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖、L-岩藻糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖、D-盐酸氨基葡萄糖和L-鼠李糖的对照品溶解于水；在对照品水溶液中加入NaOH溶液和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液混合并加热，糖的总量与NaOH和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的摩尔比为1：35-40：47-55；冷却后在混合液中加入HCl溶液中和，HCl与所述NaOH的摩尔比为1：1；烘干、萃取、取水相过滤，即得混合对照品溶液。

5.根据权利要求1所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中供试品溶液的制备方法是，将研细的云芝糖肽待测样品用三氟乙酸酸解；酸解的待测样品反复经过蒸干、乙醇溶解、再蒸干三个步骤，直至无三氟乙酸酸性气味产生为止；在蒸干的样品中加入蒸馏水溶解，再加入NaOH溶液和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液混合并加热，样品与NaOH和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的加入比例为1g：0.1-0.15mol：0.1-0.2mol；冷却后在混合液中加入HCl溶液中和，HCl与所述NaOH的摩尔比为1:1；烘干、萃取、取水相过滤，即得供试品溶液。

6.根据权利要求5所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述三氟乙酸的浓度为2-4mol/L，酸解时间为2-6小时。

7.根据权利要求4或5所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述萃取液通过滤膜过滤，滤膜的孔径为0.22-0.45μm。

8.根据权利要求4或5所述的一种云芝糖肽中单糖组分的检测方法，其特征在于：所述加热温度为65℃-75℃，所述烘干温度为65℃-75℃。