[发明专利]链黑菌素类似化合物及其制备方法、用途

权利要求书

1.一种链黑菌素类似化合物，其特征在于，其结构式如式（Ⅰ）所示：

其中，R₁=OCH₃或H，R₂=OCH₃，R₃=OCH₃；或R₁=OCH₃，R₂=OH，R₃=OH。

2.一种如权利要求1所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、以链黑菌素原始产生菌柔毛链霉菌Streptomyces flocculus CGMCC 4.1223为出发菌株，克隆得到链黑菌素生物合成基因簇；

B、对所述链黑菌素生物合成基因簇中的羧酸酯酶基因stnA或甲基转移酶基因stnQ3进行选择性失活，获得stnA基因失活突变菌株ΔstnA或stnQ3基因失活突变菌株ΔstnQ3；

C、对所述突变菌株ΔstnA进行发酵，其发酵液经分离纯化，制得如权利要求1所述的链黑菌素类似化合物，其中，R₁=OCH₃或H，R₂=OCH₃，R₃=OCH₃；

或对所述突变菌株ΔstnQ3进行发酵，其发酵液经分离纯化，制得如权利要求1所述的链黑菌素类似化合物，其中，R₁=OCH₃，R₂=OH，R₃=OH。

3.如权利要求2所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，步骤C中，所述对突变菌株ΔstnA的发酵液分离提纯包括：分离获得粗提物，提纯制得所述链黑菌素类似化合物。

4.如权利要求3所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，所述分离获得粗提物具体为：将灭菌后的大孔树脂加入到突变菌株ΔstnA发酵液中，发酵培养后，分离出大孔树脂经中等极性有机溶剂A洗脱，获得粗提物。

5.如权利要求4所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，所述中等极性有机溶剂A为乙酸乙酯、乙醚、氯仿、二氯甲烷或丙酮。

6.如权利要求3所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，R₁＝OCH₃时，所述提纯具体为：将粗提物用正相硅胶进行柱层析，用石油醚和中等极性有机溶剂B的混合物作为流动相洗脱，经HPLC分析检测，收集含有R₁=OCH₃的所述链黑菌素类似化合物的馏分浓缩得到粗分离物A，粗分离物A经反相硅胶层析，用体积浓度为60%～70%的甲醇水溶液洗脱，经HPLC检测后合并馏分，浓缩干燥即得。

7.如权利要求3所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，R₁=H时，所述提纯具体为：将粗提物用正相硅胶进行柱层析，用石油醚和中等极性有机溶剂B混合后作为流动相洗脱，经HPLC分析检测，收集含有R₁=H的所述链黑菌素类似化合物的馏分浓缩得到粗分离物B；粗分离物B经反相硅胶层析，用体积浓度为50%～60%的甲醇水溶液洗脱，经HPLC检测后合并馏分，浓缩干燥即得。

8.如权利要求6或7所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，所述作为流动相的石油醚和中等极性有机溶剂B的体积比为1:3～10:1。

9.如权利要求8所述的链黑菌素类似化合物的制备方法，其特征在于，所述中等极性有机溶剂B为乙酸乙酯、乙醚、氯仿、二氯甲烷、丙酮或异丙醇。