[发明专利]一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法。 

背景技术

巴氏杆菌病（pasteurellosis）是由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性、热性传染疾病。动物巴氏杆菌病的急性型常以败血症和出血性炎症为主要特征，所以过去又叫“出血性败血症”；慢性型常表现为皮下结缔组织，关节及各脏器的化脓性病灶，并多与其他疾病混合感染或继发。此类疾病一年四季均可发生，造成的危害贯穿了整个养殖周期，并且很容易发生交叉感染。若得不到有效地控制，将给养禽业造成严重的经济损失。 

鸡群发病时应立即采取治疗措施，有条件的地方应通过药敏试验选择有效药物全群给药。磺胺类药物、氯霉素、红霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、喹乙醇均有较好的疗效。对常发地区或鸡场，药物治疗效果日渐降低，本病很难得到有效地控制，却直接导致肉禽类食品抗生素残留、激素残留、重金属残留和农药残留大大超过我国自订的综色无污染标准和国际出口标准；另有部分养殖企业采用中药制剂方式对鸡群进行该类疫病的防治，但由于种种原因，中药制剂禽药的效果不甚理想，其主要原因是禽类对中药药剂的吸收不好，药效在鸡体上得不到较好的体现，因而疫病在鸡群中无法从根本上得到控制。 

发明内容

本发明说要解决的技术问题提供一种提取产品无污染且安全高效、价格低 廉的用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法。 

本发明的技术方案是：一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 

（1）制备多杀性巴氏杆菌菌体抗原 

a、培养多杀性巴氏杆菌，以羊血营养琼脂斜面传代，在30-40摄氏度的培养温度下基本培养，收集得到的纯菌种； 

b、将菌种在营养肉汤培养基中扩大培养，收集得到的菌体； 

c、对菌种进行低温超声波破碎，离心收集菌体蛋白，分成两份，分别加入完全福氏佐剂和不完全福氏佐剂，再将其乳化之后就可以得到完全福氏佐剂菌体抗原疫苗和不完全福氏佐剂菌体抗原疫苗； 

（2）对产卵母鸡进行免疫 

a、选用健康产卵母鸡隔离饲养，第一次采用进行皮下多点注射完全福氏佐剂多杀性巴氏杆菌菌体疫苗； 

b、上述（2）-a步骤完成一周后，继续注射不完全福氏佐剂菌体抗原疫苗1次 

c、上述（2）-b步骤完成二周后，继续注射不完全福氏佐剂菌体抗原疫苗1-3次； 

d、上述（2）-c步骤完成一周后开始收集母鸡产下的鸡蛋，备用； 

（3）提取卵黄抗体 

a、提取产蛋中的卵黄原液一定体积，加7～10倍于卵黄原液体积的蒸馏水，混匀，再用稀酸调pH至4.2～4.5，静置放置； 

b、使用离心机，在离心速度为6000～9000r／min对步骤（3）-a中制备的液体离心20～40min，上清液即含有所要分离的水溶性IgY； 

c、向步骤（3）-b中提取的IgY溶液中加入浓度为1%的正辛酸,搅拌10min,放入冰箱中冷冻10min,抽滤得IgY溶液；将得到的所述IgY溶液的pH调整到7.0,用硫酸铵使IgY析出,可得到纯度80%-90%的IgY。 

上述步骤（1）-a中多杀性巴氏杆菌的培养温度优选为37摄氏度。 

上述步骤（1）-b中多杀性巴氏杆菌的基本培养时间为24小时。 

上述步骤（1）-c中多杀性巴氏杆菌的扩大培养时间为24小时。 

上述步骤（2）-a中多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的注射量为0.5ML/只。 

上述步骤（2）-b中多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的注射量为0.5ML/只。 

上述步骤（2）-c中多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的注射量为2.5ML/只。 

上述步骤（3）-a中加入蒸馏水的体积9倍于卵黄原液的体积。 

上述步骤（3）-b中离心速度优选为8000r／min，离心时间优选为30min。 

与现有技术相比，本发明的有益效果是： 

（1）酸化水提取法结合辛酸萃提法是制备多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的较好方法,制备方法无环境污染,提取的产品对动物安全有效； 

（2）卵黄抗体疫苗使其直接作用于鸡体，其同源性及效用性均高于其它的生物制剂； 

（3）同时解决了抗生素药物对肉禽蛋类产品残留物的问题，生产成本低廉，有效的提高了该产品的质量。 

具体实施方式