[发明专利]一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法

权利要求书

1.一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）制备多杀性巴氏杆菌菌体抗原

a、培养多杀性巴氏杆菌，以羊血营养琼脂斜面传代，在30-40摄氏度的培养温度下基本培养，收集得到的纯菌种；

b、将菌种在营养肉汤培养基中扩大培养，收集得到的菌体；

c、对菌种进行低温超声波破碎，离心收集菌体蛋白，分成两份，分别加入完全福氏佐剂和不完全福氏佐剂，再将其乳化之后就可以得到完全福氏佐剂菌体抗原疫苗和不完全福氏佐剂菌体抗原疫苗；

（2）对产卵母鸡进行免疫

a、选用健康产卵母鸡隔离饲养，第一次采用进行皮下多点注射完全福氏佐剂多杀性巴氏杆菌菌体疫苗；

b、上述（2）-a步骤完成一周后，继续注射不完全福氏佐剂菌体抗原疫苗1次

c、上述（2）-b步骤完成二周后，继续注射不完全福氏佐剂菌体抗原疫苗1-3次；

d、上述（2）-c步骤完成一周后开始收集母鸡产下的鸡蛋，备用；

（3）提取卵黄抗体

a、提取产蛋中的卵黄原液一定体积，加7～10倍于卵黄原液体积的蒸馏水，混匀，再用稀酸调pH至4.2～4.5，静置放置；

b、使用离心机，在离心速度为6000～9000r／min对步骤（3）-a中制备的液体离心20～40min，上清液即含有所要分离的水溶性IgY；

c、向步骤（3）-b中提取的IgY溶液中加入浓度为1%的正辛酸,搅拌10min,放入冰箱中冷冻10min,抽滤得IgY溶液；将得到的所述IgY溶液的pH调整到7.0,用硫酸铵使IgY析出,可得到纯度80%-90%的IgY。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（1）-a中多杀性巴氏杆菌的培养温度优选为37摄氏度。

3.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（1）-b中多杀性巴氏杆菌的基本培养时间为24小时。

4.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（1）-c中多杀性巴氏杆菌的扩大培养时间为24小时。

5.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（2）-a中多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的注射量为0.5ML/只。

6.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（2）-b中多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的注射量为0.5ML/只。

7.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（2）-c中多杀性巴氏杆菌菌体疫苗的注射量为2.5ML/只。

8.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（3）-a中加入蒸馏水的体积9倍于卵黄原液的体积。

9.根据权利要求1所述的一种用于治疗多杀性巴氏杆菌病的卵黄抗体的制备方法，其特征在于所述步骤（3）-b中离心速度为8000r／min，离心时间为30min。