[发明专利]一种鉴别金银花和山银花的方法及其应用有效
| 申请号： | 201210372344.6 | 申请日： | 2012-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN103173532A | 公开（公告）日： | 2013-06-26 |
| 发明（设计）人： | 陈士林;侯典云;宋经元;姚辉 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所;河南科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;张庆敏 |
| 地址： | 100193 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 金银花 山银花 方法 及其 应用 | ||
1.一种鉴别金银花和山银花的方法，包括PCR扩增ITS2核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的方法，包括以下步骤：
1）提取样品DNA；
2）PCR扩增ITS2序列的片段；
3）对扩增产物进行拼接，获得ITS2基因间隔区；
4）构建样品的ITS2序列的NJ树。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述样品为金银花药材或山银花药材。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在提取DNA前加入样品量3%-5%的聚乙烯吡咯烷酮PVP-40粉末。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的引物为ITS2-HF 5’-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3’；
ITS2-HR 5’-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3’。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为每25μL：
10×PCR Buffer2.5μL，25mmol/L Mg2+2μL，2.5mmol/LdNTPs2μL，2.5μmol/L引物各1.0μL，DNA模板30ng，Taq DNA聚合酶1.0U，5%的二甲基亚砜1.0μL，2%的三甲基甘氨酸0.5μL，补ddH2O至25μL。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，40个循环。
8.权利要求1-7任一项所述方法在鉴别忍冬属植物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述忍冬属植物为金银花、山银花。
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