[发明专利]一种楠木脂素A的提纯方法

说明书

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，涉及一种从红楠干燥树皮中提取纯化楠木脂素A的方法。

背景技术

红楠Machilus thunbergii Sieb.et Zucc.系樟科植物，主要分布于我国山东、江苏、浙江、安徽、江西、福建、台湾、四川、广东、广西等省区。现代药理研究表明，楠木脂素A具有免疫抑制活性，对分裂素（刀豆球蛋白A）诱导的人外周血液淋巴细胞增生有极强的抑制作用，其IC₅₀为0.02μg/ml，与强的松龙相当；另外还具有细胞毒活性，对人型白血病细胞株HL-60和Molt-4细胞具有细胞毒活性，其IC₅₀（ng/ml）分别为26和54。

楠木脂素A（Machilin A），分子式为C₂₀H₂₂O₄，分子量为326.39，为无色针晶，是从红楠的树皮分离出的一种木脂素类化合物。

发明内容

本发明的目的是提供一种楠木脂素A的提纯方法，该方法提率高、成本低，适合规模化生产。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种楠木脂素A的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）酶解：取原料红楠干燥树皮，经粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-5小时，并充分搅拌；

（2）提取：将上述酶解液过滤，取滤渣用5-6倍药材重量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

（3）富集：将浸膏过大孔吸附树脂柱，醇水洗脱，收集洗脱液；

（4）纯化：将上述洗脱液减压回收乙醇，上硅胶柱（硅胶粒度为100-200目），乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得粗品；

（5）高速逆流色谱分离：粗品采用高速逆流色谱分离，以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，比例为（1-5）:（5-9）:（3-7），收集目标成分，浓缩干燥即得高纯度楠木脂素A。

步骤（1）中所述酶可选纤维素酶、葡聚糖酶和果胶酶中的一种或几种，酶用量为2-3.5‰，pH为4-4.6，酶解温度为45-50℃。

步骤（2）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为80-90%。

步骤（3）中所述大孔树脂选自AB-8、XAD-16、XDA-8或HZ806型中的一种。

步骤（3）中所述醇水洗脱为3-4BV10%-20%乙醇水溶液→4-6BV80%-90%乙醇水溶液。

步骤（4）中所述乙酸乙酯-乙醇体积比为3-10:1。

本发明采用酶解提取，有效成分更容易溶出，提高了提取率；采用采用大孔树脂和硅胶柱粗分，比萃取法处理量大、含量高，更容易操作；采用高速逆流色谱分离，操作简单，制备周期短，产品无损失，可得到高含量的楠木脂素A，产品纯度较高。

具体实施方式：

实施例1：

取红楠干燥树皮粉碎过60目筛，称取5kg，加15LpH4.2的纤维素酶水溶液（每kg生药加入2.2g纤维素酶）进行浸泡半小时，然后在42℃下水浴酶解3小时，并充分搅拌，过滤，取滤渣用5倍药材重量的80%乙醇加热回流提取1小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入XAD-16大孔吸附树脂柱，先取3BV10%乙醇洗脱杂质，再取4BV80%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇，上硅胶柱层析（硅胶粒度为100目），用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集楠木脂素A流分，减压浓缩，冷冻干燥得楠木脂素A粗品；取氯仿、甲醇、水，按比例1:5:3在分液漏斗中充分混合，静置，取下相注满高速逆流色谱柱，开启主机，设置转速900rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，调整流速为3ml/min，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备合并流分，得楠木脂素A1.3g，经HPLC检测，含量98.2%。

实施例2：