[发明专利]用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌及其用途

权利要求书

1.一种用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述菌的分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GXA-28，保藏编号为CCTCC NO：M 2012347，保藏日期为2012年9月14日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。

2.根据权利要求1所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GXA-28的培养方法包括如下步骤：

制备菌悬液：将海沙样品接入装有80~120ml无菌生理盐水的250ml三角瓶中，室温下磁力搅拌25~40分钟，制成菌悬液，于90~110℃处理8~15min；

菌悬液稀释、菌落挑取：将步骤（1）的菌悬液采用10倍稀释法梯度稀释成不同浓度的菌悬液，选择10⁵、10⁶和10⁷倍的菌悬液100μL涂布于固体分离培养基平板上，45~60℃恒温培养20~25h后，挑取菌落表面粘稠、用牙签能挑起拉丝的单菌落；

划线纯化：用平整、圆滑的接种环，在无菌操作条件下，挑取少量步骤（2）中的单菌落，在固体分离培养基平板上连续划线，将划线后的平板至于45~60℃恒温培养15~20h后，挑取平板上的纯种单菌落至试管斜面，经培养后保存；

传代培养：用平整、圆滑的接种环，在无菌操作条件下，挑取少量斜面保存的菌种转接至另一支新鲜试管斜面上，45~60℃恒温条件下，传代培养15~20h；

摇瓶检测发酵性能获取目标菌株：用平整、圆滑的接种环挑取斜面上长度为1~2cm的菌苔接入装有25~30ml液体种子培养基的250ml三角瓶中，摇床转速160~250rpm，40~50℃培养10~15h至菌株对数生长中期；将所得种子液按1~10%接种量接入装有20~80ml液体发酵培养基的250ml三角瓶中，摇床转速160~250rpm，40~50℃培养18~25h后，检测发酵液中γ-聚谷氨酸产量，选取产量最高者为目标菌株，即枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GXA-28。

3.根据权利要求2所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述固体分离培养基的浓度组分如下：葡萄糖8~12g/l，酵母膏3~6g/l，谷氨酸和/或谷氨酸盐3~6g/l，MgSO₄·7H₂O0.1~0.2g/l，KH₂PO₄ 0.3~0.5g/l，琼脂10~15g/l，pH值 6.5 ~ 7.5，蒸馏水配制。

4.根据权利要求2所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述液体种子培养基的浓度组分如下：葡萄糖8~12g/l，酵母膏3~6g/l，谷氨酸和/或谷氨酸盐3~6g/l，MgSO₄·7H₂O0.1~0.2g/l，KH₂PO₄ 0.3~0.5g/l，pH值 6.5 ~ 7.5，蒸馏水配制。

5.根据权利要求2所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述液体发酵培养基浓度组分如下：葡萄糖20~50g/l，酵母膏2~5g/l，谷氨酸和/或谷氨酸盐15~30g/l，MgSO₄·7H₂O0.1~0.2g/l，KH₂PO₄ 0.3~0.5g/l，pH值 6.5 ~ 7.5，蒸馏水配制。

6.根据权利要求3~5中任一项所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述谷氨酸为L-谷氨酸。

7.根据权利要求3~5中任一项所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述谷氨酸盐为谷氨酸钠和市售味精中的任意一种或几种混合物。

8.一种如权利要求1~7中任一项所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌的用途，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GXA-28是在高温发酵生产γ-聚谷氨酸方面的应用，其高温发酵的温度为40 ~ 50℃。

9.根据权利要求8所述的用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌的用途，其特征在于：所述高温发酵的温度为45 ~ 50℃。