[发明专利]一种树突状细胞疫苗制备方法

权利要求书

1.一种树突状细胞疫苗制备方法，其特征在于采用如下制备步骤：（1）取17ml病患自体血，采用人淋巴细胞分离液分离出红细胞、单核淋巴细胞、血浆；（2）用GT-T551无血清培养基调整单核淋巴细胞浓度为2×10⁶个/ml；（3）将调整好浓度的单核淋巴细胞以3ml/孔加入6孔板中，贴壁16小时；（4）吸弃6孔板的每个孔内的上层未贴壁细胞，在每个孔的下层即留下未成熟DC细胞；（5）再在6孔板的每个孔内分别加入DC培养基3ml，置于二氧化碳培养箱内，二氧化碳浓度为5％，温度为37℃，培养2～3天；（6）吸弃6孔板的每个孔内DC培养基一半1.5ml，每个孔内再补充DC培养基1.5ml，进行半量换液；（7）以第一次加入DC培养基开始计算的第6天，荷载自体肿瘤抗原，使6孔板的每个孔内的自体肿瘤抗原的浓度为20μg/ml；（8）24小时后检测成熟DC细胞的数量和成熟度；所述的DC培养基由上述步骤（1）中分离出的自体血浆、GM-CSF、IL-4、Flt3、及GT-T551无血清培养基所组成，其中自体血浆占整个DC培养基体积的1％，GM-CSF占整个DC培养基的浓度为50ng/ml，IL-4占整个DC培养基的浓度为100ng/ml，Flt3占整个DC培养基的浓度为100ng/ml，GT-T551无血清培养基占整个DC培养基体积的96%。