[发明专利]检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物及试剂盒

权利要求书

1.一种检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物，其特征在于：该基因探针组合物包括TEL基因探针，AML1基因探针，PAX5基因探针，P16基因探针和IKZF1基因探针。

2.根据权利要求1所述的基因探针组合物，其特征在于：所述基因探针组合物包括：

TEL基因探针：RP11-654E9(UCSC genome browser)；

AML1基因探针：RP11-77G18(UCSC genome browser)；

PAX5基因探针：RP11-243F8(UCSC genome browser)；

P16基因探针：RP11-97A22(UCSC genome browser)；

IKZF1基因探针：RP11-663L2(UCSC genome browser)。

3.根据权利要求1或2所述的基因探针组合物，其特征在于：所述TEL基因探针、AML1基因探针、PAX5基因探针、P16基因探针和IKZF1基因探针均为经过荧光素标记的探针。

4.权利要求1-3任一项所述基因探针组合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)、克隆筛选：检索UCSC genome browser，NCBI Clone Registry，Ensembl Genome Browser数据库分别含有TEL、AML1、PAX5、P16、IKZF1基因的所有细菌人工染色体(BAC)克隆，并对这些克隆进行筛选，选出最佳的克隆；

2)、克隆培养和鉴定：按照筛选确定的克隆编号购买BAC克隆(美国Invitrogen公司)，取5-10微升克隆菌液加到3-5毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37℃振摇活化培养8-16小时；然后将菌液全部加入至400-500毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37℃震摇培养8-16小时；对TEL、AML1、PAX5、P16、IKZF1的BAC克隆用相对应的基因引物进行多聚酶链式反应扩增，用1-2％的琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析，从而完成待选克隆的分子鉴定；

3)、基因探针的制备和鉴定：获得目的基因的克隆后，提取大量DNA，酶切DNA后采用缺口平移的方法对酶切后的DNA进行荧光素标记，再对TEL，AML1，PAX5，P16和IKZF1基因探针组合后进行沉淀和浓缩，将制作好的探针组合物溶解到含有50％去离子甲酰胺的杂交缓冲液中，即得荧光标记探针组杂交混合液，采用正常人外周血单个核细胞甩片进行探针鉴定。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述克隆筛选步骤中含TEL基因最优的克隆，编号为RP11-654E9；含AML1基因最优的克隆，编号为RP11-77G18；含有PAX5基因最优的克隆，编号为RP11-243F8；含有P16基因最优的克隆，编号为RP11-97A22；含有IKZF1基因最优的克隆，编号为RP11-663L2。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：克隆培养和鉴定步骤中使用的引物序列为：

TEL基因探针：上游引物5’-TTTGGATGAAGAGCCTCGTTGTG-3’和

下游引物5’-GCGTGATATTGCCGAGATTTGC-3’；

AML1基因探针：上游引物5’-CCAAGAGGATTCATAGTCACGGG-3’和

下游引物5’-TCCTTGCCCTTACTGACCTTCC-3’；

PAX5基因探针：上游引物5’-GATCCTTCCAGCTTGGTCTCC-3’和

下游引物5’-GGCTGAACGTGTATGTCTTCCC-3’；

P16基因探针：上游引物5’-CTTCCTGGACACGCTGGT-3’和

下游引物5’-AGTCTTCATTGCTCCGCAGT-3’；

IKZF1基因探针：上游引物5’-CGGAAATCTGAAAGGGAACTG-3’和

下游引物5’-GATGAAGAGAATGGGCGTGC-3’。

7.一种急性淋巴细胞性白血病荧光原位杂交检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-3任一项所述基因探针组合物。