[发明专利]一种橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法，针对可溶性糖和淀粉的检测。

背景技术：

天然橡胶（顺式多聚异戊二烯）是重要的商业、国防和交通工业原料（Ko J H et al.,2003）。目前全球所需天然橡胶的90%左右来自巴西橡胶树。淀粉的动员对于胶乳再生和补偿持续割胶伤害有不可忽略的作用。木质部中淀粉可以看做一种长效储存源，而树皮中淀粉只是作为即时的缓冲。木质部中的可溶性糖作为一个转运库，树皮中的可溶性糖可以被看做一种中间的、随时准备被使用的储藏。对树皮和木质部中淀粉消长规律进行研究对于我们分析不同胶树产胶潜力和调整割胶强度有重要意义，在此条件下掌握橡胶树树皮和木质部的可溶性糖和淀粉提取和测定方法是解决这项工作的前提。

目前，人们对于树木淀粉提取的研究较少，在我国，80年代初期梁尚朴对橡胶树树木的淀粉含量进行过测定（割胶制度改革论文集一，p148-153），由于条件限制，当时使用割胶后的树皮直接染色后按照颜色深浅分级，肉眼分辨淀粉的等级，该方法没有将淀粉含量定量，也没有测定木质部淀粉含量。在国外，加拿大研究人员对于杨树和松树的叶子和根的淀粉进行提取和测定，采用的是酶解的方法（Pak S C and Simon M L， 2004），由于该方法操作过程步骤较多，花费时间长，需要的样品量较多，对于橡胶树而言，树皮是割胶的保证，尽量保护试验用树也是保障后续试验能顺利进行的基础，因此，所述方法并不适合于橡胶树的树木淀粉检测。

如何建立橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物提取及含量测定方法，成为本领域需要解决的技术问题，目前，关于这方面的技术成果，并未见诸报道。

发明内容

本发明的目的在于，鉴于目前本领域对于分析不同胶树产胶潜力和调整割胶时间和强度没有一种较为理想的检测方法，提供一种利用橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物提取及含量测定方法。

本发明的目的是这样实现的：一种橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法，其特征在于：分别建立可溶性糖626nm处光吸收量的标准曲线和淀粉580nm处光吸收量的标准曲线；从橡胶树树皮和木质部中取样后，分别提取树皮和木质部样品中可溶性糖提取液和淀粉提取液；定容100μl可溶性糖提取液加入3ml蒽酮试剂，90℃保温15min，冷却至室温后在626nm处测定光吸收量，对照可溶性糖的标准曲线，分别计算树皮和木质部样品的可溶性糖含量；取2ml淀粉提取液加入100μlI_2-KI溶液，在580nm处测定光吸收量，对照淀粉的标准曲线，分别计算树皮和木质部样品的淀粉含量。

在本发明的技术方案中：

可溶性糖标准曲线是这样建立的：

首先确定用硫酸-蒽酮法测定可溶性糖含量的最高光吸收峰：用80%乙醇溶液分别配制浓度为1mg/ml的葡萄糖溶液和蔗糖溶液，将它们分别按照1:4、3:7、1:1、7:3和4:1体积比混合形成100μl的可溶性糖混合液，在可溶性糖混合液加入3ml硫酸-蒽酮试剂，90℃保温15min，冷却至室温后在300nm-900nm范围内扫描光吸收，确定可溶性糖混合液扫描最高吸收峰为626nm处；

再利用硫酸-蒽酮法测定不同浓度梯度可溶性糖在626nm光吸收下的标准曲线，选取的可溶性糖浓度分别为：0μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml，取100μl加入3ml硫酸-蒽酮试剂，90℃保温15min，冷却至室温后626nm处测定光吸收；以光吸收测定值为横坐标，可溶性糖浓度为纵坐标绘制标准曲线；

硫酸-蒽酮试剂是用150mg蒽酮溶于100ml稀硫酸配制成的，其中，100ml稀硫酸采用70ml浓硫酸与30ml水混合；

淀粉的标准曲线是这样建立的：

首先配制以下溶液：80%Ca(NO₃)₂溶液的配制：80gCa(NO₃)₂.2H₂O溶于水中，定容至100ml；I₂-KI溶液的配制：1.3gI₂加上3.5gKI，溶解后容量瓶定容至100ml；用1mg/ml淀粉母液按比例用80%Ca(NO₃)₂溶液分别稀释成50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml淀粉溶液；