[发明专利]一种橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法

权利要求书

1.一种橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法，其特征在于：分别建立可溶性糖626nm处光吸收量的标准曲线和淀粉580nm处光吸收量的标准曲线；从橡胶树树皮和木质部中取样后，分别提取树皮和木质部样品中可溶性糖提取液和淀粉提取液；定容100μl可溶性糖提取液加入3ml蒽酮试剂，90℃保温15min，冷却至室温后在626nm处测定光吸收量，对照可溶性糖的标准曲线，分别计算树皮和木质部样品的可溶性糖含量；取2ml淀粉提取液加入100μlI_2-KI溶液，在580nm处测定光吸收量，对照淀粉的标准曲线，分别计算树皮和木质部样品的淀粉含量。

2.根据权利要求1所述的橡胶树非结构性碳水化合物含量测定方法，其特征在于：

可溶性糖标准曲线是这样建立的：

首先确定用硫酸-蒽酮法测定可溶性糖含量的最高光吸收峰：用80%乙醇溶液分别配制浓度为1mg/ml的葡萄糖溶液和蔗糖溶液，将它们分别按照1:4、3:7、1:1、7:3和4:1体积比混合形成100μl的可溶性糖混合液，在可溶性糖混合液加入3ml硫酸-蒽酮试剂，90℃保温15min，冷却至室温后在300nm-900nm范围内扫描光吸收，确定可溶性糖混合液扫描最高吸收峰为626nm处；

再利用硫酸-蒽酮法测定不同浓度梯度可溶性糖在626nm光吸收下的标准曲线，选取的可溶性糖浓度分别为：0μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml，取100μl加入3ml硫酸-蒽酮试剂，90℃保温15min，冷却至室温后626nm处测定光吸收；以光吸收测定值为横坐标，可溶性糖浓度为纵坐标绘制标准曲线；

硫酸-蒽酮试剂是用150mg蒽酮溶于100ml稀硫酸配制成的，其中，100ml稀硫酸采用70ml浓硫酸与30ml水混合；

淀粉的标准曲线是这样建立的：

首先配制以下溶液：80%Ca(NO₃)₂溶液的配制：80gCa(NO₃)₂.2H₂O溶于水中，定容至100ml；I₂-KI溶液的配制：1.3gI₂加上3.5gKI，溶解后容量瓶定容至100ml；用1mg/ml淀粉母液按比例用80%Ca(NO₃)₂溶液分别稀释成50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml淀粉溶液；

取不同浓度淀粉母液2ml，加入100μlI₂-KI溶液，在580nm处测定光吸收，以光吸收测定值为横坐标，淀粉溶液浓度为纵坐标绘制标准曲线。

3.根据权利要求1所述的一种橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法，其特征在于：

树皮和木质部样品中的可溶性糖提取液和淀粉提取液是这样获得的：

a) 用直径0.5cm小型打孔器，直接用手将打孔器戳进树皮内，从树皮中取出相应树皮，作为树皮样品；再在树皮取样口用小型电钻在木质部打孔部位钻孔取出木屑，作为木质部样品，钻孔深度为3.0cm，取样后用大小合适的铁钉堵住树皮和木质部取样口；

b) 分别对树皮和木质部样品液氮研磨，磨碎后烘箱40℃过夜烘干，取10-200mg，在0.5ml-4ml的80%乙醇80℃浸提40min，中间斡旋搅拌， 12000rpm×10min离心，收集上清，残渣加80%乙醇重提一次，合并上清，上清中加入活性炭10mg，80℃脱色30min，离心后取清液定容至10ml，分别获得树皮和木质部的可溶性糖提取液；

c) 将提取可溶性糖后的树皮和木质部沉淀残渣分别用2ml80%Ca(NO₃)₂溶液沸水浴5min浸提，4000rpm离心5min，收集上清，残渣用2ml80%Ca(NO₃)₂冲洗一次，离心收集上清，合并提取液，分别获得树皮和木质部淀粉提取液。

4.根据权利要求1~3之一所述的橡胶树树皮和木质部非结构性碳水化合物含量测定方法，其特征在于：

可溶性糖标准曲线的曲线方程为：

Y=427.00X ，R²=0.9942；

样品中可溶性糖含量的计算公式为：

样品中可溶性糖含量=427.00×A×定容体积/样品质量；

式中：A为测得的光吸收，427.00×A计算为与光吸收对应的糖浓度；可溶性糖含量的单位为μg/mg，糖浓度的单位为μg/ml, 定容体积的单位为ml，样品质量的单位为mg；

淀粉标准曲线的曲线方程为：

y=177.84x，r²=0.993；

样品中淀粉的计算公式为：

样品中淀粉含量（μg/mg）=177.84×A×定容体积/样品质量；

式中：A为测得的光吸收，177.84×A计算为与光吸收对应的淀粉浓度;淀粉含量的单位为μg/mg，淀粉浓度的单位为μg/ml, 定容体积的单位为ml，样品质量的单位为mg。