[发明专利]一种制备波戈甾醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学领域，具体涉及一种制备波戈甾醇的方法。

背景技术

波戈甾醇（Pogosterol）CAS登录号为149155-26-0，分子式为C₂₉H₄₆O₆，分子量为490.68，是一种甾体皂苷元，mp.154-157℃。主要存在于菊科（Compositae）植物波戈斑鸠菊Vernonia pogosperma的叶中，现代药理研究表明，波戈甾醇具有一定的细胞毒活性，体外对L-1210细胞呈弱的细胞毒作用，目前对波戈甾醇的研究较少，因此需要一种高效、环保、简单、适合工业化生产的制备方法，为波戈斑鸠菊中有效成分以及波戈甾醇的进一步研究提供丰富的原料。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备波戈甾醇的方法，该方法工艺简单、高效、环保、提率高。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

（1）将波戈斑鸠菊干燥叶粉碎成粗粉，加入6-15倍药材重量的质量百分比浓度为80-100%的甲醇水溶液，室温浸泡提取5-10h，过滤，将滤渣重复上述操作2-3次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；

（2）将上述步骤得到的甲醇提取物加少量水分散，用二氯甲烷溶液萃取，分取水层和二氯甲烷层，将水层用水饱和正丁醇进行萃取，分取上层，即正丁醇层，减压回收正丁醇得总甾体皂苷；

（3）将总甾体皂苷加适量水共沸，冷却至45-50℃，调节pH4.5-5.5，加入生物酶保温酶解1-4小时，酶解液减压浓缩、离心得粗品；

（4）将上述粗品用高速逆流色谱仪制备分离纯化，得到波戈甾醇粗晶；

（5）将上述粗晶用二氯甲烷-甲醇（1:3，V/V）重结晶，过滤，干燥得到波戈甾醇纯品。

步骤（3）所述的生物酶可选蜗牛酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶或半纤维素酶中的一种或几种重混合，用量为原料的1-3.5‰。

步骤（4）所述高速逆流色谱制备条件为：溶剂系统选用氯仿-甲醇-水，体积比为1:4:2，以上相为固定相，下相为流动相，转速为850-1000r/min，流动相流速为2-4ml/min。

本发明的有益效果是：在常温下进行分离和分解，不引入酸碱，目标化合物不发生结构改变，最大程度保持了化合物的稳定性。采用采用高速逆流色谱分离，产品无损失，无废弃物产生，再进行重结晶操作可得到高纯度波戈甾醇，工艺简便、得率高。

具体实施方式：

实施例1：

取波戈斑鸠菊干燥叶经粉碎机粉碎，称取粉末10kg，加入12倍药材重量的85%甲醇溶液中室温浸泡提取8h，过滤，将滤渣重复上述操作，再提取2次，合并滤液，减压浓缩成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2倍体积量的水分散，然后用与水等体积量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷层，减压回收二氯甲烷（用于下次萃取使用），将水层继续用水饱和正丁醇萃取3次，分取上层即正丁醇层，合并正丁醇层，减压回收正丁醇（用于下次萃取使用）得总甾体皂苷；将总甾体皂苷加适量水共沸30min，冷却至45℃，盐酸调节pH至4.5，加入18g蜗牛酶保温酶解2小时，酶解液减压浓缩，离心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色谱柱作固定相，开启高速逆流色谱仪，调整转速900r/min，注入流动相，平衡后，调整流速2.5ml/min，甲醇溶解粗品，进样，通过检测仪定时收集流分，流分回收试剂干燥，连续制备，得到波戈甾醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇（1:3，V/V）重结晶，滤出结晶，干燥得到657mg波戈甾醇，经HPLC检测，其含量为98.8%。

实施例2：