[发明专利]一种利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒及应用

权利要求书

1.一种利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述试剂盒由磁珠悬浮液、基因提取液和磁架构成；所述磁珠悬浮液以氯化铁和氯化亚铁为磁性材料，在氮气和氢氧化钠的作用下，通过化学共沉淀形成磁性粒子，再将磁性粒子用硅酸钠修饰，水分散，获得所述磁珠悬浮液；所述基因提取液包括红细胞裂解液、细胞裂解液、结合液、蛋白酶K工作液、漂洗液1、漂洗液2、漂洗液3和洗脱液；

所述红细胞裂解液终浓度组成为：100~200mmol/L氯化铵、5~20mmol/L钾盐，0.05~ 0.1mmol/L EDTA，溶剂为水，pH为7.0~8.0；

所述细胞裂解液终浓度组成为：50 ~ 200mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐a、50~500mmol/L螯合剂、500 ~ 800mmol/L钠盐和质量终浓度0.5~5%十二磺基硫酸钠，溶剂为水，pH为7.0~8.0，所述螯合剂为EDTA；

所述结合液终浓度组成为： 2~8mol/L离液盐a、0.2~2mol/L醋酸钠，溶剂为水，pH为4.0~6.0，所述离液盐a为盐酸胍、异硫氰酸胍、硫氰酸胍、碘化钠、碘化钾、高氯酸钠或氯化锂；

所述漂洗液1终浓度组成为：1 ~ 4 mol/L的离子液盐b，0.1~2mol/L醋酸钠，体积终浓度20~30%的无水乙醇，溶剂是水，pH值4.0~ 6.0，所述离液盐b为盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钠或高氯酸钠；

所述漂洗液2终浓度组成为：1~4 mol/L的离液盐c，0.1~2mol/L醋酸钠，体积终浓度50~70%的无水乙醇，pH值4.0~ 7.0，溶剂为水，所述离液盐c为盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钠或高氯酸钠；

所述漂洗液3为体积浓度75%无水乙醇水溶液或无水乙醇；

所述洗脱液终浓度组成为：10~20mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，0.5mmol/L EDTA水溶液，pH9.0。

2.如权利要求1所述利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述磁珠以磁珠悬浮液的形式存在，即每毫升磁珠悬浮液中含有直径为1-5μm的磁珠50mg，其余为水。

3.如权利要求1所述利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述磁珠按如下方法制备：（1）磁性粒子的配制：首先对4mol/L的氢氧化钠水溶液通氮气进行除氧处理，然后将氢氧化钠水溶液置于80℃的水浴中并持续通入氮气；其次，将0.5mol/L氯化铁水溶液与0.5mol/L氯化亚铁盐酸溶液以体积比2:1混合，缓慢倒入上述水浴中的氢氧化钠水溶液中，搅拌反应30min，将反应液静置冷却沉淀，去除上清；最后取沉淀用无水乙醇和水各清洗三遍，60℃真空干燥，得到所述磁性粒子；所述氢氧化钠水溶液与氯化铁水溶液和氯化亚铁盐酸溶液的总体积比为1:0.6；（2）磁性粒子修饰配基：取上述磁性粒子用去离子水a进行超声分散，获得磁性粒子分散液，向所述磁性粒子分散液中分别加入无水乙醇a、质量浓度22~25%浓氨水、体积浓度40%的正硅酸乙酯的乙醇溶液，在400rpm下搅拌24小时，将反应混合液用无水乙醇与水分别清洗三次，最后用去离子水b分散，获得所述磁珠悬浮液；所述去离子水a的体积用量以磁性粒子质量计为100ml/g，所述无水乙醇a体积用量以磁性粒子质量计为400ml/g，浓氨水体积用量以磁性粒子质量计为5ml/g，正硅酸乙酯的乙醇溶液体积用量以磁性粒子质量计为5ml/g。

4.如权利要求1所述利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述红细胞裂解液终浓度组成为：150mmol/L氯化铵、10mmol/L碳酸氢钾，0.1mmol/L EDTA，溶剂为水，pH为7.4。

5.如权利要求1所述利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述细胞裂解液终浓度组成为：100 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐a、100mmol/L螯合剂、500mmol/L氯化钠和质量终浓度0.5%十二磺基硫酸钠，溶剂为水，pH为8.0，所述螯合剂为EDTA。

6.如权利要求1所述利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述结合液终浓度组成为：3.6mol/L高氯酸钠、0.2mol/L醋酸钠、溶剂为水，pH为6.0。