[发明专利]一种奥曲肽粗品的固相制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药多肽类原料药的化学合成，尤其涉及一种奥曲肽粗品的固相制备方法。

背景技术

奥曲肽（octrotide），它是由8个氨基酸组成的多肽，主要药物作用有:可抑制生长激素、促甲状腺激素、胃肠道和胰腺内分泌激素的病理性分泌过多;可选择性地减少门静脉及其侧枝循环血流量和压力；降低食管胃底静脉的压力；抑制胰高糖素的分泌和拮抗胰高糖素对内脏血管的扩张作用，而对全身血液动力学影响小;可抑制胆囊的排空，抑制胆囊收缩素，促胰液素的分泌，减少胰酶的损伤作用；对Oddi括约肌具有松弛作用，有利于胰液的排泄。可抑制胃酸-胃蛋白酶和胃泌素的分泌，可改善胃粘膜血液供给;可抑制胃肠蠕动。用于门脉高压所致的食管及胃底静脉破坏出血；应激性溃疡及消化性溃疡所致出血；预防和治疗急性胰腺炎及其并发症；治疗胰瘘和胃肠道瘘管，以及其他突眼性甲状腺肿、肢端肥大症、特发性假性肠梗阻。

目前奥曲肽的合成方法有固相法和固液相法:

如专利US.pat.no.49354031983报道了一种液相制备奥曲肽的方法，该方法采用两个片段，在液相中缩合，用三氟乙酸硼酸作为氧化剂环化支链肽。

专利US6987167B2采用液相方法，采用Fmoc-Cys(AcM)-OH为某一原料，一步采用NaBH4方法脱除保护剂并环化，本步骤收率达80%以上。

专利US6476186B1采用Fmoc-Thr(ol)(tBu)-2-CTC树脂为原料，固相合成八肽。

专利200510029221.2采用了固相合成法，用2-氯-三苯甲基树脂为原料，按照固相合成的方法一次连接保护氨基酸，获得保护八肽树脂，切割后，在pH7-11条件下用空气氧化，得到粗品。

专利200510024502.9采用固相合成方法，使用氯甲基树脂作载体，首先用氢化钠溶液及2-羟甲基-3，4-二氢吡喃在二甲乙酰胺中室温与氯甲基树脂反应，得到3，4-二氢吡喃羟甲基树脂(DHP HM Resin)，再在对甲苯磺酸吡啶盐作用下将芴甲氧羰基-(O-叔丁醚)苏氨醇(Fmoc-Thr(tBu)-ol)连到DHP HMResin上去，然后按照Fmoc/tBu固相多肽合成的方法将氨基酸逐个连上，最后用三氟醋酸∶水∶苯甲硫醚∶乙二硫醇的混合溶液将肽从树脂上切下，得到的粗品，粗品采用空气氧化法氧化形成硫硫键，经制备HPLC纯化冷冻得到奥曲肽。

专利20051002874.1采用固相合成方法，包括步骤如下：1)用固相合成法合成具有D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr氨基酸残基序列的直链八肽；2)氧化直链八肽，得到氧化型奥曲肽；3)将氧化型奥曲肽在醋酸盐溶液中经转盐和纯化后，得到醋酸奥曲肽。本发明的醋酸奥曲肽的制备方法中，全部采用DMF，HOBT/HBTU和DIEA进行接肽反应。

可见现有技术中存在步骤繁琐，收率低，成本高等缺陷。

因此，本领域迫切需要提供一种有效、简便的固相合成奥曲肽粗品的制备方法。

发明内容

本发明旨在提供一种固相合成奥曲肽粗品的制备方法。

本发明提供了一种奥曲肽粗品的固相制备方法，依次连接具有Fmoc或Boc保护基团的氨基酸，获得保护的八肽树脂，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得奥曲肽粗品，所述方法依次包括如下步骤：

(a)获得Fmoc-Thr-树脂；

(b)在上述的树脂中，加入脱保护剂进行处理后，将具有Fmoc或Boc保护基团的氨基酸、缩合剂和含有步骤(a)获得的树脂的溶液混合，进行接肽反应，然后再加入脱保护剂处理，再将具有Fmoc或Boc保护基团的氨基酸、缩合剂和含有经过接肽反应获得的多肽树脂的溶液混合，进行接肽反应，如此重复，获得Fmoc或Boc-D-Phe¹-Cys²(Trt)-Phe³-D-Trp⁴(Boc)-Lys⁵(Boc)-Thr⁶(tBu)-Cys⁷(Trt)-Thr⁸-OL-树脂；

所说的具有Fmoc保护基团的氨基酸，依次为：

(1)Fmoc-Thr-OL、

(2)Fmoc-Cys(Trt)-OH或Fmoc-Cys(Acm)-OH、

(3)Fmoc-Thr(tBu)-OH、(4)Fmoc-Lys(Boc)-OH或Fmoc-Lys(Dde)-OH、