[发明专利]孕马血清促性腺激素双抗体夹心ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种ELISA检测试剂盒，具体地说是一种检测孕马血清促性腺激素的双抗体夹心ELISA试剂盒。 

背景技术

孕马血清促性腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotrophin PMSG)又称马绒毛膜促性腺激素(equine chorionic gonadotropin，eCG)。PMSG是从怀孕40-120天母马血液中提纯的一种糖蛋白激素，是一种经济实用的促性腺激素，在生产上常用以代替较昂贵的促卵泡素（FSH）而广泛应用于动物的诱发发情、超数排卵或增加排卵率(如提高双羔率)；对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也都可收到一定疗效。由于孕马血清中PMSG的含量受多种因素的影响，不同妊娠期、不同品种、同一品种不同年龄及胎次等都对其影响较大。因此在用血清提纯PMSG之前，能对血清中PMSG效价进行检测，对于生产提纯具有重要的指导意义。 

综合生殖激素的检测方法有多种多样，主要有放射性免疫分析法、免疫胶体金检测法、酶联免疫分析法(ELISA)、反向间接血凝法、色谱技术、化学发光技术及生物传感器技术等。目前，我国关于PMSG的检测有3种方法。其一是大鼠卵巢增重法，该法是依据《中华人民共和国兽药规范》（1993）血促性素（孕马血清促性腺激素PMSG）生物检定法，采用PMSG能促进大鼠卵巢增长的原理，将不同浓度的标准品注入相同来源的大鼠体内，根据卵巢增重情况绘制标准曲线，再将同体积待检样品注入同系相同生理状况的大鼠体内，测定其卵巢增重从而确定激素含量。由于该法灵敏度低、实验周期长、饲养实验动物变数大、影响因素较多，不易于生产与科研中推广应用。其二是反向间接血凝法，该法的原理是将纯化的PMSG抗体吸附到双醛化得羊红血球表面，遇到相应抗原，血球即被动凝集，按完全凝集孔样本的稀释倍数即可得到抗原的血 凝效价。此法虽达到快速检测目的，但不同批次醛化红血球差异大，且抗体纯度要求高，质量要求均一，导致测定结果的差异大，也不适于生产应用。其三是放射性免疫检测法，使放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。此法快速准确，样品需要量少，但由于此种方法具有高度放射性，对操作人员健康有害，同时检测所需的仪器较昂贵，也不利于推广应用。另外免疫胶体金检测法只能实现定性和半定量检测，目前阶段不宜推广使用。色谱技术、化学发光技术及生物传感器技术同样也可以用于激素检测，但由于其检测条件的限制性，在试验室中作为科研检测方法可以应用，但不适合于野外检测，对实际生产的指导意义不大。 

ELISA凭借其高度的灵敏度、良好的特异性、检测速度及低检测成本等优势已被广泛应用于生物、化学、医学、环境科学等学科的分析检测中。近年来，随着生物医学的研究进展，免疫学以其独特的优势有力的推动了医学和生物学中各个领域的发展。目前美国DRG公司生产的孕马血清促性腺激素快速检测试剂盒，能够在短短几个小时内完成多个样品的检测，准确省时。但由于进口价格昂贵，一个96孔检测板需要花费1800~2000元，同时由于DRG公司生产的试剂盒检测范围为0-80IU，国内有些马种的最高含量达到140IU，超出了其检测范围，因此急需建立一种快速、准确、省时、简便易操作的检测PMSG含量的方法并研制试剂盒，解决进口昂贵、检测范围窄的问题。 

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种孕马血清促性腺激素单克隆抗体。 

本发明的目的之二在于提供一种用于检测孕马血清促性腺激素的双抗体夹心ELISA试剂盒，以克服上述不足。 

本发明提供一种孕马血清促性腺激素PMSG单克隆抗体杂交瘤细胞株D-3，其保藏编号为CGMCC No.6450。 

本发明提供一种孕马血清促性腺激素PMSG单克隆抗体杂交瘤细胞株A-4，其保藏编号为CGMCC No.6449。 

杂交瘤细胞株D-3和A-4已于2012年9月5日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，邮编100101）保藏，分类命名为杂交瘤细胞，保藏号分别为CGMCC No.6450和CGMCCNo.6449。 

本发明提供的一种孕马血清促性腺激素PMSG单克隆抗体，是由杂交瘤细胞株D-3或A-4分泌获得，所述杂交瘤细胞株D-3的保藏编号为CGMCC No.6450，所述杂交瘤细胞株A-4的保藏编号为CGMCCNo.6449。