[发明专利]孕马血清促性腺激素双抗体夹心ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种孕马血清促性腺激素PMSG单克隆抗体杂交瘤细胞株D-3，其保藏编号为CGMCC No.6450。

2.一种孕马血清促性腺激素PMSG单克隆抗体杂交瘤细胞株A-4，其保藏编号为CGMCC No.6449。

3.一种孕马血清促性腺激素PMSG单克隆抗体，其由杂交瘤细胞株D-3或A-4分泌获得，所述杂交瘤细胞株D-3的保藏编号为CGMCCNo.6450，所述杂交瘤细胞株A-4的保藏编号为CGMCC No.6449。

4.一种用于检测PMSG的试剂、药剂或试剂盒，其包括权利要求3所述的单克隆抗体。

5.一种检测PMSG的方法，其特征在于，使用权利要求3所述的单克隆抗体。

6.检测孕马血清促性腺激素ELISA试剂盒，其包括：

（1）包被PMSG单克隆抗体的酶标板；

（2）酶标记的PMSG单克隆抗体；

其中，包被在酶标板的PMSG单克隆抗体与酶标记PMSG单克隆抗体分别针对PMSG蛋白不同的抗原决定簇。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述包被在酶标板的PMSG单克隆抗体与酶标记PMSG单克隆抗体分别为杂交瘤细胞株D-3或A-4分泌获得。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述包被在酶标板的PMSG单克隆抗体为杂交瘤细胞株D-3分泌获得，酶标记PMSG单克隆抗体为杂交瘤细胞株A-4分泌获得。

9.如权利要求6-8任一所述的试剂盒，其还包括以下试剂中的一种或多种：洗涤液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液、PMSG标准品。

10.如权利要求6-8任一所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记PMSG单克隆抗体的标记酶为辣根过氧化物酶，具体标记方法包括如下步骤：取5mg的HRP溶于1mL三蒸水，加入新鲜配制的0.1mol/L NaIO₄0.2mL，室温下避光搅拌20min，混匀后装入透析袋中，以0.001mol/L pH4.4醋酸钠缓冲液4℃透析过夜，加20μL 0.2mol/L pH9.5碳酸盐缓冲溶液，使pH升高到9.0-9.5，加入含有10mg纯化PMSG单克隆抗体IgG1mL，混匀后装入预先活化的透析袋中，以0.05mol/L pH 9.6碳酸盐缓冲液4℃透析过夜，使辣根过氧化物酶与抗体充分结合，取出透析袋中的液体，加入4mg/mL的硼氢化钠100μL，置4℃还原6-8小时，加入等体积的饱和硫酸铵，4℃放置过夜，3000rpm，离心10min，将所得的沉淀溶于1ml 0.01mol/L的PBS中，装入透析袋中以0.01mol/L的PBS透析过夜充分除去硫酸铵，透析24-36h，离心除去沉淀，即得纯化酶标记抗体。