[发明专利]SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法

权利要求书

1.SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）提取待测鸡DNA样品，用DNA特异性引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

2）对PCR扩增产物中的鸡第3号染色体70486623bp位点进行单核苷酸多态性检测。

2.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤1）所述的DNA特异性引物对的脱氧核糖核苷酸序列为：

上游引物：5’-Biotin-CGACTCTCAACGCGGGAAC-3’

下游引物：5’-CTGGGGGCAGCCATCTTG-3’

3.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤1）所述的PCR扩增，其25μl反应体系终浓度为：

4.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤1）所述的PCR扩增的反应条件为：94℃变性5min；94℃变性30sec，63℃退火30sec，65℃延伸1min，其中每扩增1个循环退火温度降低1℃，共10循环；94℃变性30sec，53℃退火30sec，65℃延伸1min，共30循环；65℃延伸7min；20℃保存；取2μl用于琼脂糖检测，扩增得到单一的目的条带后用于进一步检测。

5.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤2）所述的单核苷酸多态性检测采用焦磷酸盐测序方法，为在PCR扩增产物中加入测序引物，放入PyroMarkID焦磷酸测序仪进行SNP检测。

6.如权利要求5所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，所述的测序引物的脱氧核糖核苷酸序列为：

5’-GCGTCGCACACGGGC-3’

7.如权利要求5所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，所述的焦磷酸盐测序方法具体为：

在步骤2）PCR扩增产物中加入Binding Buffer 38μl、Sepharoe Beads 2μl和灭菌水20μl，充分混匀10分钟，转移到反应板中，加入Annealing Buffer12μl，10μM测序引物1μl，放入PyroMarkID焦磷酸测序仪进行SNP检测，读取结果。

8.用于权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法的试剂盒，包含脱氧核糖核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物。

9.权利要求1-7任一项所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法在鸡的育种中的应用。

10.权利要求9所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法在鸡的育种中的应用，为在鸡分子标记辅助选择中的应用。