[发明专利]快速检测和鉴定生物物体的方法

权利要求书

1.一种鉴定未知生物体的方法，其特征在于，所述方法包括：

a)使所述生物体的核酸接触至少一对寡核苷酸引物，此引物能与所述核酸的序列杂交，其中所述序列侧接有该生物体的可变核酸序列；

b)扩增所述可变核酸序列产生扩增产物；

c)测定所述扩增产物的分子量；

d)将所述分子量与在多种已知生物体上进行步骤a)-c)获得的一种或多种扩增产物的分子量相比较，其中一种匹配可鉴定所述的未知生物体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，与所述至少一对寡核苷酸引物杂交的所述序列是高度保守的。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增步骤包括聚合酶链式反应。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增步骤包括连接酶链式反应或链置换扩增。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物体是细菌、病毒、细胞或孢子。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸是核糖体RNA。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸编码RNA酶P或RNA依赖的RNA聚合酶。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增产物在分子质量测定前离子化。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括在使所述核酸与所述至少一对寡核苷酸引物接触之前，从所述生物体中分离核酸的步骤，。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括用不同寡核苷酸引物对进行步骤a)-d)的步骤，并将结果与在步骤d)的不同的多种已知生物体上进行步骤a)-c)获得的一种或多种扩增产物的分子量相比较。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一种或多种分子量包含在分子量数据库中。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增产物通过电喷射离子化、基质辅助的激光解吸或快速原子轰击来离子化。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分子量用质谱测定。

14.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述质谱选自傅立叶变换离子回旋共振质谱法(FT-ICR-MS)、离子陷阱、四极、磁扇面、飞行时间(TOF)、Q-TOF或三重四级。

15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括在存在与腺苷、胸苷、鸟苷或胞苷有不同的分子量的腺嘌呤、胸苷、鸟苷或胞苷类似物时进行步骤b)。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述寡核苷酸引物在所述引物中各个三联体位置1和2上含有碱基类似物，其中所述碱基类似物能以比天然碱基更高的亲和力结合其互补物。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述引物在所述引物中各个三联体位置3上含有通用碱基。

18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述碱基类似物选自2，6-二氨基嘌呤、丙炔T、丙炔G、吩嗪和G-夹子。

19.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述通用碱基选自肌苷、胍尿苷、5-硝基吲哚、3-硝基吡咯、dP、dK和1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖)-咪唑-4-酰胺。

20.一种鉴定未知生物体的方法，其特征在于，所述方法包括：

a)使所述生物体的核酸接触至少一对寡核苷酸引物，此引物能与所述核酸的序列杂交，其中所述序列侧接有一可变核酸序列；

b)扩增所述可变核酸序列产生扩增产物；

c)测定所述扩增产物的碱基组成；

d)将所述碱基组成与在多种已知生物体上进行步骤a)-c)获得的一种或多种扩增产物的碱基组成相比较，其中一种匹配可鉴定所述的未知生物体。

21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，与所述至少一对寡核苷酸引物杂交的所述序列是高度保守的。

22.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述扩增步骤包括聚合酶链式反应。