[发明专利]一种具有减少泡沫细胞脂质积累的杏鲍菇多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及杏鲍菇多糖的分离纯化，具体是一种具有减少泡沫细胞脂质积累的杏鲍菇多糖的制备方法。

背景技术

近年来，随着经济的发展和生活质量的提高，不合理的饮食习惯而带来的疾病例如肥胖症、高血脂、动脉粥样硬化等呈现逐年上升的趋势，而有大量研究结果表明若能有效地控制血脂水平，则能有效地预防疾病的发生。食用药用菌杏鲍菇具有很高的营养价值，其多糖等活性组分因其出色的保健和治疗功能越来越受到人们的重视，但是目前绝大多数的研究限于多糖提取工艺的优化，大量地徘徊在低水平的重复研究上，对其和活性成分的分离和代谢调控机制的研究还相对较少，因此很难有创新性的突破。通过体外生化试验研究证明了杏鲍菇水溶性的多糖（PEPE）具有较强的清除自由基的能力，且在四氯化碳诱导的肝损伤小鼠模型上证实了PEPE通过提高抗氧化物酶的活性从而保护肝；同时在高血脂动物模型研究结果表明其具有降血脂的作用，但是目前在活性多糖的分离纯化及结构鉴定上仍然是难题。本发明发现两种杏鲍菇中具有潜在降血脂的单一的多糖组分，提供了一种有效地制备和鉴定单一组分的方法。

发明内容

本发明的目的是提供了一种可以从杏鲍菇水溶性多糖中分离纯化得到具有减少泡沫细胞内脂质积累的单一多糖的方法，本发明制备得到了两种水溶性的，产量较高的，工艺简单的，具有清除自由基、减少泡沫细胞内脂质积累的两种单一的杏鲍菇多糖，并对这两种单一组分进行了结构鉴定。在此基础上进行单一组分的结构检测，得到了多糖的分子量，构型，单糖构成和比例，以及单糖间连接键等相关结构信息。该两种组分经过在细胞学水平上的检测结果表明均具有显著减少泡沫细胞脂质积累的作用，并且具有较好地清除自由基作用

本发明所述的具有减少泡沫细胞脂质积累活性的杏鲍菇多糖的制备方法，其步骤如下：

（1） 首先进行杏鲍菇活性多糖的分离纯化，将烘干的杏鲍菇子实体菇粉用90℃热水浸提3 h，四倍体积乙醇沉淀得到的粗多糖；

（2）粗多糖经过分子截留量为3.5 kDa的透析膜，去离子水透析过夜，去除小分子量的杂质，干燥沉淀后复溶于去离子水，加入胰蛋白酶去除去蛋白质，加入双氧水去除色素，最后加入四倍体积的无水乙醇沉淀多糖，离心干燥后得到水溶性的杏鲍菇多糖(PEPE)； 

（3）将步骤（2）中所获得的PEPE通过DEAE-52阴离子交换柱，采用浓度为0.05M磷酸缓冲液（PBS）洗脱一个柱床体积，接着用浓度分别为0.05 M、0,1 M、0,2 M、0,4 M、0,8 M、1M的氯化钠溶液逐级进行进行浓度梯度洗脱，流速1ml/min，毎管收集8 ml，收集第一洗脱峰的洗脱液，命名为PEPE-A；

（4）将步骤（3）得到的PEPE-A经过凝胶柱Sephadex G-100进行进一步洗脱，洗脱液为0.05 M氯化钠溶液，流速0.5 ml/min,毎管收集2 ml，分别收集第一和第二洗脱峰的洗脱液得到两种杏鲍菇多糖，命名为PEPE-1和PEPE-2。

对PEPE-1和PEPE-2进行单一组分的结构检测，得到了多糖的分子量，构型，单糖构成和比例，以及单糖间连接键等相关结构信息。

PEPE-1平均分子量37.50 kDa，单糖组成主要为葡萄糖，含有少量的甘露糖和半乳糖，其中PEPE-1中甘露糖：葡萄糖：半乳糖的比例为1.42：96.26：2.32，高碘酸氧化实验和核磁结果检测显示，主要为β（1→3）连接键构型，同时含有α（1→4，1→6）连接。

PEPE-2平均分子量30.00 kDa，单糖组成主要为葡萄糖，含有少量的甘露糖和半乳糖，PEPE-2中甘露糖：葡萄糖：半乳糖的比例为1.18：95.54：3.28，高碘酸氧化实验和核磁结果检测显示，主要为β（1→3）连接键构型，同时含有α（1→4，1→6）连接。

本发明与现有技术相比具有的优点为：（1）PEPE-1和PEPE-2两种多糖组分单一，得率较高，制备简单，且溶于水；（2）PEPE-1和PEPE-2两种单一多糖组分具有显著地抗氧化和减少泡沫细胞内脂质积累的作用；（3）该方法制备的PEPE-1和PEPE-2两种单一多糖组分安全无毒，可以作为食品添加剂使用。

附图说明

图1为PEPE-1和PEPE-2两种单一多糖组分的分离纯化图和高效液相图谱。

图2为PEPE-1和PEPE-2两种单一多糖组分的气相色谱图。

图3为PEPE-1和PEPE-2两种单一多糖组分的红外光谱。