[发明专利]嗜肺军团菌检测试剂盒

权利要求书

1.一种嗜肺军团菌核测试剂盒，其特征在于：基于荧光共振能量转移原理，选取一种猝灭荧光基团，采用由上游引物、下游引物组成的一对引物及由锚定探针、猝灭探针组成的一对标记探针，建立新型的实时荧光PCR熔解曲线法对嗜肺军团菌进行检测；

所述上游引物为5’-AGGGTTGATAGGTTAAGAGC-3’，

所述下游引物为5’-CCAACAGCTAGTTGACATCG-3’，

所述锚定探针为5’-CCCATACTCGAGTCAACC(FAM)-3’，

所述猝灭探针为5’-(BHQ1)TATTATCTGACCGTCCCAG(ph)-3’。

2.如权利要求1所述的嗜肺军团菌检测试剂盒，其特征在是基于实时荧光PCR方法建立的试剂盒，其组分为DNA提取液、荧光PCR缓冲液、阴性对照及阳性对照，

其中，DNA提取液的成分包括5%Chelex-100溶液、10mM三羟甲基氨甲烷盐酸盐、0.1mM乙二胺四乙酸二钠、0.1%叠氮钠、200μg/ml蛋白酶K，

荧光PCR缓冲液包括上游引物0.1～0.3μM、下游引物1～3μM 、锚定探针0.3～0.5μM、猝灭探针0.1～0.3μM、三羟甲基氨甲烷盐酸20mM、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸0.3～0.6mM、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷0.3～0.6mM、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸0.3～0.6mM、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.3～mM、氯化镁3～6mM、热启动酶1～5U，

阴性对照0.5ml，为1×10⁴个菌/ml的大肠杆菌培养物，

阳性对照0.5ml，为1×10⁴个菌/ml的嗜肺军团菌培养物。

3.如权利要求1所述的嗜肺军团菌检测试剂盒，其特征在于检测结果判定时，熔解曲线分析程序为95℃ 1min和40℃ 2min，以1℃/5s的速度，从40℃升温至85℃；嗜肺军团菌的Tm值均为57℃，其它非嗜肺军团菌及非军团菌均无57℃的Tm值。