[发明专利]快速提取及扩增加拿大一枝黄花基因组的方法

权利要求书

1.快速提取加拿大一枝黄花基因组的方法，其特征是包括以下步骤：

1）、称取0.1～0.2 g加拿大一枝黄花的叶片放入容器中，加入液氮后，将叶片研磨成粉末；

2）、在步骤1）的所得物中加入38~42 μL的浓度为0.23~0.27 mol/L的NaOH溶液作为提取剂，再加入150~170 μL的浓度为100 mmol/L的 Tris-HCl以及加入10～20 μL的β-巯基乙醇进行研磨；然后离心，取上清液并加ddH₂O至200 μL；得加拿大一枝黄花的DNA模板。

2.根据权利要求1所述的快速提取加拿大一枝黄花基因组的方法，其特征是：

所述步骤1）中，容器为1.5 mL的离心管，所述研磨为选取以下任意一种方法：

方法一、加入液氮1次，直至整个离心管被液氮充满；待离心管内的液氮挥发至≤50 μL时，用塑料研磨棒将离心管中的叶片研磨成粉末；

方法二、加入液氮2次，待离心管内第一次加入的液氮挥发完毕后立即加入第二次液氮，待离心管内第二次加入的液氮挥发至≤50 μL时，用塑料研磨棒将离心管中的叶片研磨成粉末；每次加入的液氮均为直至整个离心管被液氮充满。

3.根据权利要求1或2所述的快速提取加拿大一枝黄花基因组的方法，其特征是：

所述步骤2）中的离心为：10000~14000 r/min离心4~6 min。

4.根据权利要求3所述的快速提取加拿大一枝黄花基因组的方法，其特征是：

所述步骤2）为：

加入40 μL的浓度为0.25 mol/L的NaOH作为提取剂，再加入160 μL浓度为100 mmol/L的 Tris-HCl以及加入10～20 μL的β-巯基乙醇研磨1~2 min；再于12000 r/min离心5 min；取上清液至200 μL的离心管内，加ddH₂O至200 μL；得加拿大一枝黄花的DNA模板。

5.利用如权利要求1~4中任一方法所得的加拿大一枝黄花的DNA模板进行扩增的方法，其特征是：

PCR体系为：

ddH₂O13.2 μL，10×Buffer 2.5 μL，dNTP（0.25 mmol/mL，each）2 μL，聚乙烯聚吡咯烷酮（质量浓度10%）2.5 μL，牛血清白蛋白（质量浓度1%）2.5 μL ，引物（10 μmol/L）1μL，DNA模板1 μL，rTaq（5 unit/μL）0.3 μL；

PCR反应程序：

94 ℃变性4 min；

94 ℃变性45 s，52 ℃退火45 s，72 ℃延伸45 s，循环39 次；

72 ℃延伸7 min；

4 ℃保存；

PCR反应在PCR仪中进行。

6.根据权利要求5所述的加拿大一枝黄花的DNA模板进行扩增的方法，其特征是：

所述引物为以下任一引物：

引物1     AGAGAGAGAGAGAGAGT

引物2     CACACACACACACACAG

引物3     ACACACACACACACACT

引物4     ACACACACACACACACG

引物5 AGAGAGAGAGAGAGAGYT

引物6    GAGAGAGAGAGAGAGAYC

引物7 GAGAGAGAGAGAGAGAYG

引物8    ACACACACACACACACYA

引物9    ATGATGATGATGATGATG

引物10GGAGAGGAGAGGAGA    。