[发明专利]一种植物双元表达载体pMHZ111及应用

权利要求书

1.一种植物双元表达载体pMHZ111，它是将PDK基因插入了基础载体pCLD04541中；所述的PDK基因，其碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示。

2.一种植物双元表达载体pCLD04541-PDK制备方法，它包括：

1）以克隆载体pHANNIBAL为模板，用引物：

P1：5’-AGCGAATTCTAGTATAAAATAGTTAAGTG-3’

P2：5’-ATGGAATTCCAATCCAAATGTAAGATC-3’

进行PCR扩增；获得其碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示的PDK基因；插入pMD218T载体中克隆；

2）采用限制性内切酶EcoR Ι分别酶切基础载体pCLD04541和pMD18T-PDK，试剂盒回收纯化目的基因，采用T4 DNA连接酶进行连接。

3.一种植物双元干扰表达载体pMHZ111 -SQS-SA，它是在pCLD04541中插入了其碱基序列如序列表SEQ ID NO.4所示的PDK -SQS-SA。

4.一种植物双元干扰表达载体pMHZ111 - SQE-SA，它是在pCLD04541中插入了其碱基序列如序列表SEQ ID NO.7所示的PDK -SQE-SA。

5.一种植物双元干扰表达载体pMHZ111 -SQS-SA制备方法，它包括：

1）利用 Trizol 法提取人参总RNA，反转录为cDNA，以cDNA 为模板，分别用引物：

正义基因上游引物（SQS-S1）：5'- TCTAGACTTGACACTGTTGAGGATG- 3’

正义基因下游引物（SQS-S2）：5'- GGATCCTGTAGCCAAATCTTCTGCC- 3'

反义基因上游引物（SQS-A1）：5'- CTCGAGTTGACACTGTTGAGGATGA- 3'

反义基因下游引物（SQS-A2）：5'- AAGCTT TCTGTAGCCAAATCTTCTG- 3'

克隆 SQS基因的正义SQS-S及反义片段SQS-A，分别连接到pMD18T上，获得pMD18T-SQS-S 和pMD18T- SQS-A；

2）采用限制性内切酶Xba Ⅰ和BamH Ⅰ分别酶切一种植物双元表达载体pCLD04541-PDK和pMD18T-SQS-S，试剂盒回收纯化目的基因，采用T4 DNA连接酶进行连接；

3）采用限制性内切酶XhoⅠ和HindⅢ分别酶切pMHZ111-SQS-S和pMD18T-SQS-A，试剂盒回收纯化目的基因，采用T4 DNA连接酶进行连接。