[发明专利]一种肝吸虫抗体IgG4生物素-亲和素酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝吸虫抗体IgG4生物素-亲和素酶联免疫检测试剂盒及其检测方法，属于寄生虫病免疫检测领域。

背景技术

肝吸虫病是严重危害人体健康的一种人兽共患病，由华支睾吸虫、麝猫后睾吸虫和猫后睾吸虫等引起，主要分布于远东，如中国、日本、朝鲜、越南和中南亚国家。我国除青海、宁夏、新疆、内蒙古、西藏等尚无报道外，已有24个省、市、自治区有不同程度流行，人群感染率在1%～30%之间。而保虫宿主动物感染的地区范围更广，感染率与感染度多比人体感染高，对人群的感染具有潜在的威胁。我国的肝吸虫病主要是华支睾吸虫感染所致，至少已有2300年以上的流行历史。由于肝吸虫寄生于人的肝胆管内，其占位性机械挤压作用和排泄分泌物的长期刺激作用所引起的肝、胆组织炎性病变，可引起严重的肝脏功能损害，甚至癌变。一些地区长期以来形成的食生或半生淡水鱼和虾的饮食习惯，是引发肝吸虫病的重要原因，我国肝吸虫病的流行呈东高西低趋势，主要流行于广东、广西、黑龙江、吉林、江苏等省。经过50多年的积极防治，我国肝吸虫病的防治工作取得了显著的成绩，各地区人群感染率均有不同程度的下降。但随着我国经济社会的发展，生活水平的提高，人们开始追求饮食方式的多样化，生鱼片、火锅和烧烤等饮食方式又重新流行，进食未完全煮熟的鱼制品，或居民烹饪生鱼时不注意厨具的卫生等均会导致肝吸虫病的发生。肝吸虫病的发病率又有上升之势，全年肝吸虫病的发病人数可高达1000-1500万，是当前我国最严重的食源性寄生虫病之一，严重危害我国人民的健康和社会经济发展。

肝吸虫因寄生在宿主的胆道中，临床症状不明显，由于缺乏特异性症状和体征，给临床诊断带来了一定的困难。华支睾吸虫病的诊断主要依靠实验室诊断。目前实验室诊断方法主要有如下几种：

病原学检测

（1）粪便查虫卵法，主要有盐酸乙醚离心沉淀法，细筛定量透明法，小杯稀释计数法，检测病人粪便中是否存在肝吸虫虫卵。由于肝吸虫虫卵小，排量少，在粪便中的分布不均，容易漏检，尤其是早期感染者阳性率低。

（2）十二指肠引流液查虫卵法，胆汁中含虫卵较多，阳性率高，但只适合于部分住院病人检查。

病原学检测法具有确诊价值，但因操作复杂，不易被检验人员及病人所接受，易漏检，难以满足应用的需要。

B超检测

肝吸虫寄生于肝胆管中，引起肝实质、肝胆管及胆囊的组织病变，如肝组织硬化，肝胆管、胆囊壁组织增厚，纤维化，引起胆道及胆囊扩张。在B超及CT检测时出现不同的组织病变特征，表现为：肝脏型，肝实质点状回声增强，增粗，有短棒状、索状或网状回声，肝内光点密集不均匀；胆管型，胆管扩张，管壁粗厚，回声增强，扩张的胆管内有点状、索状、斑块状或线形回声；胆囊型，胆囊壁增厚、粗糙，囊内有点状、棒状、索状、飘带状、条形或斑块形回声，有时伴有小结石或胆泥；混合型，可同时出现上述2种以上类型。由于其它肝胆管病变同样可以出现类似病变体征，B超检测没有特异性，只能作为临床诊断的一个辅助手段。

CT检测

患者均有不同程度的肝内弥漫性胆管扩张，多为肝被膜下小胆管呈囊状或杵状扩张，近肝门侧肝内胆管向被膜侧均匀扩张。少数病例的胆囊内可见团块状或不规则似软组织密度的条状物漂浮在胆汁中，个别病例胰管轻度扩张。CT检测可作为临床诊断的参考。

免疫学检测

肝吸虫的排泄分泌物可以刺激宿主免疫系统，产生抗肝吸虫抗原免疫反应。检测肝吸虫抗原特异性免疫反应或免疫反应的产物，如肝吸虫抗原特异性抗体IgG(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型)具有辅助诊断价值。常用的方法有：皮内试验，是检测肝吸虫感染诱导的抗肝吸虫抗原变态反应，曾经是一种常用的肝吸虫感染筛查方法，但因存在假阳性，使用中可能会引起过敏反应，存在生物安全风险，现已被停止使用。

抗体检测试验，有间接血凝试验、对流免疫电泳试验、酶联免疫吸附试验、间接荧光抗体试验等均是检测肝吸虫感染刺激产生的抗肝吸虫抗原抗体IgG，由于这些方法均使用粗制肝吸虫成虫抗原，但检测病人结果出入较大，且与其它寄生虫感染(尤其是肺吸虫、血吸虫及旋毛虫类感染)有较明显的交叉反应，不能用作确诊，仅作为流行病学调查初筛之用。