[发明专利]一种肠上皮间淋巴细胞的分离方法

权利要求书

1.一种淋巴细胞分离方法，其特征在于所述分离方法是利用温差法与淋巴细胞分离液相结合的方法。

2.根据权利要求1所述淋巴细胞分离方法，其特征在于所述淋巴细胞是肠上皮间淋巴细胞。

3.根据权利要求1或2所述淋巴细胞分离方法，所述温差法是指待分离细胞在0-5℃冰浴后，在0-5min内转移到30-40℃培养基中。

4.根据权利要3所述淋巴细胞分离方法，所述温差法是指待分离细胞在4℃冰浴后，瞬间转移到37℃培养基中。

5.根据权利要求3所述淋巴细胞分离方法，所述冰浴时间为1-4小时。

6.根据权利要求5所述淋巴细胞分离方法，所述冰浴时间为2小时。

7.根据权利要求3或5所述淋巴细胞分离方法，所述培养基是含有1mM二硫代苏糖醇和10％小牛血清的DMEM培养基。

8.根据权利要求7所述淋巴细胞分离方法，所述淋巴细胞来源于大鼠小肠组织。

9.根据权利要求8所述淋巴细胞分离方法，其特征在于由以下步骤组成：

小肠组织的提取和处理：将禁食过夜的健康大鼠处死后，提取小肠组织，并用PBS冲洗肠腔，剪去peyer’s结后，置于含有10％小牛血清、1％青链霉素双抗的PBS中冰浴；

iIELs的分离：利用30-40℃预热的含有1mM二硫代苏糖醇和10％小牛血清的DMEM培养基反复冲洗小肠组织肠腔，顺着肠道轻轻挤出肠腔中内容物；

静置后离心，利用大鼠淋巴细胞分离液分离iIELs；

所获得的iIELs的鉴定：通过胎盘蓝染色检测iIELs的活性，利用抗大鼠的APC-CD3、FITC-CD8和PE-TCRγδ荧光抗体进行染色，通过流式细胞仪进行鉴定。