[发明专利]一种自体外周血淋巴细胞的培养方法

权利要求书

1.一种培养自体外周血淋巴细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）从外周血中分离外周血单个核细胞，然后，重悬于无血清培养基中，使外周血单个核细胞的细胞浓度为（1～2）×10⁶个/mL，静置培养72～84小时，制得初培养液；

（2）向步骤（1）制得的初培养液中补加无血清培养基至初培养液的2～3倍，同时添加白细胞介素2，使白细胞介素2的浓度为1×10³U/mL，静置培养84～96小时，得二次培养液；

（3）向步骤（2）制得的二次培养液中补加无血清培养基至二次培养液的4～5倍，同时添加白细胞介素2，使白细胞介素2的浓度为（1～2）×10³U/mL，静置培养72～84小时，得培养液；

（4）将步骤（3）制得的培养液均匀分成2份，然后用无血清培养基补足体积并添加白细胞介素2，使白细胞介素2的浓度为（1～2）×10³U/mL，静置培养72～84小时，重复本步骤2～3次，制得自体外周血淋巴细胞；

所述步骤（1）中的无血清培养基，每毫升含有如下组分：

干扰素γ500～2500U、植物凝集素P 250～1500ng、白细胞介素1α50～250U、细胞表面分子3单克隆抗体25～150ng、细胞表面分子28单克隆抗体25～150ng。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的无血清培养基，每毫升含有如下组分：

干扰素γ1000～2000U、植物凝集素P 500～1000ng、白细胞介素1α100～200U、细胞表面分子3单克隆抗体50～100ng、细胞表面分子28单克隆抗体50～100ng。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的无血清培养基，每毫升含有如下组分：

干扰素γ2000U、植物凝集素P 1000ng、白细胞介素1α200U、细胞表面分子3单克隆抗体100ng、细胞表面分子28单克隆抗体100ng。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）～（4）中的静置培养条件为在温度为37℃、CO₂体积百分比为含量为5～7.5%、相对饱和湿度为100%的CO₂培养箱中培养。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）还包括将制得的自体外周血淋巴细胞经离心后，重悬于保存液中，所述保存液含有如下组分：

体积百分比为20%的人血清白蛋白1～7mL，0.9wt%氯化钠溶液定容至100mL。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述保存液含有如下组分：

体积百分比为20%的人血清白蛋白5mL，0.9wt%氯化钠溶液定容至100mL。