[发明专利]一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法

权利要求书

1.一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

A预处理

将肉鸭粪样用缓冲液浸泡不少于5分钟后，充分震荡均匀，得肉鸭粪样混悬液，将肉鸭粪便混悬液通过离心处理，去除杂质并收集沉淀物I；

B洗涤

在步骤A所得沉淀物I中加入缓冲液，离心并去除上清液，重复离心处理至上清液无异色，得沉淀物II；

C提取

在沉淀物II中加入蒸馏水，重悬并离心，取上清液II，加入蛋白酶K和EDTA溶液的混合液振荡混匀，45-60℃水浴9-60分钟；初次离心，弃上清液，得沉淀III；在沉淀III中加裂解液和EDTA的混合液，并在低温下使DNA复性；再次离心，取上清液III，所述上清液III中含有总DNA。

2.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤A中，将肉鸭粪样用相当于其体积10倍的PBS溶液浸泡15分钟。

3.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤A中，离心处理的条件为：4℃，10000转/分钟，离心至少6分钟。

4.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤B中，在所述沉淀物I中加入PBS溶液，沉淀物I与PBS溶液的添加比例为每200-300mg沉淀物I添加1mLPBS溶液。

5.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤B中，离心处理的条件为10000转/分钟离心至少3分钟。

6.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤C中，在沉淀物II中加入与步骤B所述缓冲溶液等量的蒸馏水，重悬并离心，离心条件为10000转/分钟离心不少于3分钟。

7.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤C中，所述混合液中蛋白酶K和EDTA溶液的体积比3∶2，所述蛋白酶K的初始浓度为20mg/ml，所述EDTA溶液的初始浓度为0.15moL。

8.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤C中，所述初次离心的条件是：4℃，12000转/分钟离心10分钟。

9.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，在步骤C中，所述蛋白酶K和所述EDTA溶液的体积比为3∶2，所述沉淀物II与所述蛋白酶K的体积比为1∶10-20；所述裂解液为Clelex-100，Clelex-100与EDTA溶液的体积比为20-50∶30，所述沉淀III和所述Clelex-100的体积比为1∶10-20，所述EDTA溶液的浓度为0.15mol/L，所述蛋白酶K的浓度为20mg/mL。

10.根据权利要求1所述的一种简单快速的肉鸭粪样总DNA提取方法，其特征在于，将步骤C所得上清液III中DNA为模板进行PCR扩增，其上游引物为：5’-aacgcgaagaaccttac-3’，其下游引物为：5’-gcgtgtgtacaagaccc-3’。