[发明专利]高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法、相关CIK细胞及应用

权利要求书

1.一种高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将外周血单个核细胞分选去除CD4⁺CD25⁺Treg细胞，得到CIK前期细胞；

（2）将CIK前期细胞置于含有100ng/ml PHA、100ng/ml IL-6、10ng/ml PGE2的细胞培养液中培养24小时；

（3）转移至经1ug/ml CD3单抗包被的细胞培养瓶中，加入1000U/ml IFN-γ培养48小时；

（4）加入1000U/ml IL-2以及100ng/ml IL-1α培养4天；

（5）加入1ug/ml胰岛素继续培养7-14天。

2.根据权利要求1所述的高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，其特征在于，步骤（2）-（4）中涉及的培养的条件均为37℃、5%CO₂的条件。

3.根据权利要求1所述的高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，其特征在于，步骤（1）中的外周血单个核细胞通过采集患者抗凝血并分离得到。

4.根据权利要求3所述的高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，其特征在于，所述分离采用的方法为Ficoll密度梯度法。

5.根据权利要求1所述的高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，其特征在于，步骤（1）中分选采用的方法是磁珠分选法。

6.根据权利要求1所述的高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，其特征在于，步骤（2）中的细胞培养液是AIM-V无血清细胞培养液或X-VIVO无血清细胞培养液。

7.一种CIK细胞，其特征在于，由根据权利要求1-6任一所述的高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法制备而成。

8.根据权利要求7所述的CIK细胞在制备治疗肿瘤、感染或其它免疫相关疾病的药物中的应用。

9.一种抑制外周血单个核细胞向CD4⁺CD25⁺Treg细胞分化的方法，其特征在于，在细胞培养液加入100ng/ml IL-6和10ng/ml PGE2培养外周血单个核细胞。

10.一种促进CIK细胞增殖的方法，其特征在于，在CIK细胞培养4天后加入含胰岛素至终浓度1ug/ml的细胞培养液继续培养。