[发明专利]一种维生素B2的酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于酶联免疫吸附分析技术领域，涉及一种酶联免疫检测试剂盒，尤其涉及一种维生素B₂的酶联免疫检测试剂盒。 

背景技术

维生素B₂又叫核黄素，微溶于水，在中性或酸性溶液中加热是稳定的。为体内黄酶类辅基的组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用），当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等。体内维生素B₂的储存是很有限的，因此每天都要由饮食提供。维生素B₂的两个性质是造成其损失的主要原因，一是可被光破坏，二是在碱溶液中加热可被破坏。 

膳食调查发现，维生素B₂缺乏较为普遍。小儿由于生长发育快，代谢旺盛，若不注意，小儿更易缺乏维生素B₂。因此，除了在功能性饮料中对B族维生素的混合添加外，婴幼儿和孕妇食品中对维生素B₂也有广泛添加。如今，生产商通过混合或喷雾的方式向食品中加入适量的维生素，然而要使其均匀地分布于食品中并非易事。此外，在产品的标签上必须标注保质期内的维生素含量。考虑到在食品生产储存中部分维生素的流失，德国化工企业协会建议，超量添加的维生素量不应超过标签注明含量的50%。因此，生产商和监督部门都有必要对产品中维生素的含量进行控制。 

维生素B₂作为B族维生素其分析方法很多，主要有微生物法、薄层扫描法、荧光分析法和分光光度法等。这些方法比较繁杂、费时、重现性差、检出极限低。近年来用高效液相色谱法（HPLC）测定B族维生素的报道较多。HPLC法虽具有快速、准确、重现性好的特点，但所用仪器昂贵笨重，且需要大量的有机溶剂，样品前处理复杂，费时，费力，难以用于现场操作。酶联免疫检测法（ELISA）具有快速，准确，简易，不需要专门人员操作等优点，因此研究开发一种维生素B₂的酶联免疫检测试剂盒具有直接的经济效益和社会效益。 

发明内容

本发明目的是克服现有技术存在的上述不足，提供一种维生素B₂的酶联免疫检测试剂盒。 

本发明提供的维生素B₂酶联免疫检测试剂盒中试剂的组成包括： 

A、各孔包被有包被抗原即维生素B₂与载体蛋白的偶联物的酶标板1块； 

B、维生素B₂标准溶液：1ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，25ng/mL，50ng/mL，80ng/mL 各1瓶； 

C、酶标羊抗兔抗体溶液：辣根过氧化酶一羊抗兔IgG原液，使用时用洗涤溶液稀释成1：2000的工作浓度； 

D、维生素B₂抗体溶液：人工免疫抗原免疫动物制备所得的维生素B₂多克隆抗体原液，使用时用洗涤溶液稀释成1：2000工作浓度； 

E、发光溶液：使用400μL四甲基联苯胺(TMB)溶液、10mL pH=5.0的柠檬酸缓冲液和2μL体积百分比为30%的H₂O₂溶液混合而成，其中TMB溶液由10mg TMB+2mL DMSO混合而成； 

F、洗涤溶液：为pH=7.5、浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，其中含有吐温-20的体积分数为0.05%；所述的磷酸盐用磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制。 

G、包被溶液：1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L水中制成的溶液，调节pH=9.5； 

H、封闭溶液：10g卵清蛋白（OVA）溶于1L以上的洗涤溶液中，再加入质量分数为0.05%的NaN₃制成。 

以上所述偶联物的载体蛋白为分子量范围在6.7KDa~6.8KDa的牛血清蛋白或卵清蛋白。包被酶标板的包被抗原由维生素B₂与卵清蛋白偶合制成，制备抗体的人工免疫原由维生素B₂与牛血清蛋白偶合制成。 

所述包被抗原浓度为2μg/mL。 

所述的试剂盒对维生素B₂的最大检测范围为1ng/mL~80ng/mL。 

本发明试剂盒中涉及的相关溶液的配制 

1、本发明中酶标板的制备