[发明专利]海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物及其设计和扩增方法

权利要求书

1.海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物，其特征是由两条单链寡核苷酸链组成，其中轻链引物为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；重链引物为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物，其特征是所述的海洋鱼类包括小黄鱼、眼斑拟石首鱼、白姑鱼、黄姑鱼、日本黄姑鱼、黑鳃梅橦鱼、棘头梅橦鱼、褐鯧鮋、尖头黄鳍牙、中华乌塘鳢、青弹涂鱼、斑纹舌虾虎鱼、髭缟虾虎鱼、孔虾虎鱼、蓝点深虾虎鱼、红狼牙虾虎鱼、普氏细刺虾虎鱼、斑尾刺虾虎鱼、大弹涂鱼、矛尾虾虎鱼、舟山缰虾虎鱼、台湾沟虾虎鱼、矛尾刺虾虎鱼、双带缟虾虎鱼、犬齿背眼虾虎鱼、平头竿虾虎鱼、龙头鱼、带鱼、鲻鱼、鳜鱼、青石斑鱼、宝石石斑鱼、褐牙鲆、横带髭鲷、斜带髭鲷、黄鳍刺鲷、条石鲷、二长刺鲷、角木叶鲽、斑鰶、三线舌鳎、刺鲳、银鲳、黑鲷、黄鲫、凤鲚。

3.一种如权利要求1所述的海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物的设计方法，其特征是登录NCBI网站中的GenBank数据库搜索已测定的海洋鱼类线粒体基因组的tRNA-Phe和16S rRNA基因序列，经同源性比较，找到保守序列，并利用Premier Primer5.0软件设计出海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物。

4.一种对海洋鱼类线粒体12S rRNA基因进行扩增的方法，其特征是采用如权利要求1所述的海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物对待测样品的DNA模板溶液进行PCR扩增。

5.如权利要求4所述的一种对海洋鱼类线粒体12S rRNA基因进行扩增的方法，其特征是PCR扩增的条件为：95℃预变性5min，然后95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸75s，共35个循环，最后72℃延伸5min。

6.如权利要求4所述的一种对海洋鱼类线粒体12S rRNA基因进行扩增的方法，其特征是PCR扩增的反应体系组成为：PCR反应体系为25μL，内含2.5mM的 dNTP 2μL、10×TaqDNA聚合酶 Buffer 2.5μL、10μM的轻链引物和重链引物各1μL、5U/ul的TaqDNA聚合酶0.2μL、含100ng的DNA模板溶液 1μL及ddH₂O 17.3μL。

7.如权利要求4所述的一种对海洋鱼类线粒体12S rRNA基因进行扩增的方法，其特征是所述的待测样品来自包括小黄鱼、眼斑拟石首鱼、白姑鱼、黄姑鱼、日本黄姑鱼、黑鳃梅橦鱼、棘头梅橦鱼、褐鯧鮋、尖头黄鳍牙、中华乌塘鳢、青弹涂鱼、斑纹舌虾虎鱼、髭缟虾虎鱼、孔虾虎鱼、蓝点深虾虎鱼、红狼牙虾虎鱼、普氏细刺虾虎鱼、斑尾刺虾虎鱼、大弹涂鱼、矛尾虾虎鱼、舟山缰虾虎鱼、台湾沟虾虎鱼、矛尾刺虾虎鱼、双带缟虾虎鱼、犬齿背眼虾虎鱼、平头竿虾虎鱼、龙头鱼、带鱼、鲻鱼、鳜鱼、青石斑鱼、宝石石斑鱼、褐牙鲆、横带髭鲷、斜带髭鲷、黄鳍刺鲷、条石鲷、二长刺鲷、角木叶鲽、斑鰶、三线舌鳎、刺鲳、银鲳、黑鲷、黄鲫、凤鲚的海洋鱼类。