[发明专利]一种玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及食品、谷物和饲料中玉米赤霉烯酮污染的检测技术，具体涉及一种玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条及其制备方法和用途。

背景技术

玉米赤霉烯酮（Zenralenone, ZEN）是由多种镰刀菌产生的一种类雌激素样的真菌毒素，污染范围广泛，谷实类原料在田间、收获过程、收获后储藏期间以及饲料和食品成品储存、使用等诸多环节，都有可能受到ZEN 的污染。ZEN具有较强生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对猪、家禽、反刍动物均影响较大，给畜牧业带来很大经济损失；ZEN还具有细胞毒性、免疫毒性、肝毒性、潜在致癌性等，并且ZEN对高温稳定，不易去除，严重危害人类健康。目前大多数国家对食品、谷物、饲料中ZEN 含量进行了严格限定。

目前比较常用的检测ZEN 方法有薄层色谱法（TLC）、液相色谱法（LC）、气相色谱法-质谱法（GC-MS）、生物检测法和免疫学检测法等。以免疫化学为基础的ELISA 方法可用于大批样品的筛选，阳性结果可用HPLC 法等进一步确证，避免直接使用仪器导致成本较高的缺点，可以节省时间和费用，另外由于ELISA 法成本较低，而且具有准确、快速、特异性好、灵敏度高等优点特别适合于基层机构大面积筛选样品之需，具有广泛的应用前景。由于ZEN为半抗原，需通过竞争ELISA法检测，相应的检测人员需经过此方面培训才能获得较正确结果。而免疫荧光快速检测试纸条检测，检测者无需培训，操作简单，短时间可获得结果（10分钟左右）；若与荧光定量检测仪（读卡器）连用，可实现定量检测，因此具有良好的市场前景。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的不足，提供一种操作简单、携带方便且制备成本低，可快速检测玉米赤霉烯酮污染的玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条。

本发明的另一个目的是提供上述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条的制备方法。

本发明的另一个目的是提供上述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条的检测方法。

本发明的另一个目的是提供上述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条在检测食品、谷物、饲料中玉米赤霉烯酮污染的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

一种玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条，该检测试纸条由样品垫、荧光微球探针结合垫、醋酸纤维素膜、吸水纸和塑料底板组成；所述塑料底板上依次粘贴样品垫、荧光微球探针结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述荧光微球探针结合垫上包被了ZEN单克隆抗体的荧光微球标记物；所述硝酸纤维素膜上依次包被有羊抗鼠IgG抗体和ZEN的完全抗原ZEN-BSA，以羊抗鼠IgG抗体为质控线，以完全抗原ZEN-BSA为测试线。

上述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

（1）制备ZEN的单抗（Ab1-1G4，分泌Ab1-1G4的杂交瘤细胞1G4G10D3于2012年4月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国.武汉.武汉大学，保藏编号CCTCC NO：C201237）；

（2）通过EDC和NHS介导的与蛋白表面氨基的酰胺化反应完成抗体（抗ZEN单抗）的荧光标记；

（3）将步骤（2）制备所得抗ZEN单抗的荧光微球探针包被在结合垫上，将羊抗鼠IgG抗体和ZEN的完全抗原ZEN-BSA分别包被在硝酸纤维素膜上，羊抗鼠IgG抗体作为质控线，ZEN的完全抗原ZEN-BSA作为测试线；

（4）将样品垫、荧光微球探针结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸由一端依次粘贴在塑料底板上，即得到所需玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条。

上述步骤（1）中，抗ZEN的单抗是采用活泼酯法将ZEN与OVA偶联制备免疫抗原，ZEN与BSA偶联制备检测抗原，免疫BALB/c小鼠，细胞融合，经过筛选后获得杂交瘤细胞，通过小鼠体内诱生法大量制备腹水型ZEN单克隆抗体；分泌ZEN单克隆抗体的杂交瘤细胞1G4G10D3于2012年4月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：C201237。

上述步骤（2）中，采用EDC和NHS介导的与蛋白表面氨基的酰胺化反应进行抗体的荧光微球探针标记，其操作步骤采用常规操作即可实现本发明。

上述步骤（3）中，把标记好ZEN单抗的荧光微球探针溶液喷在已处理好的结合垫上，37℃抽风烘干，时间为12~24h；标记好ZEN单抗的荧光微球探针溶液可按照1~4μl/cm的喷量喷在已处理好的结合垫上，优选2μl/cm的喷量。