[发明专利]一种玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条及其制备方法和用途

权利要求书

1. 一种玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条，其特征在于该检测试纸条由样品垫、荧光微球探针结合垫、醋酸纤维素膜、吸水纸和塑料底板组成；所述塑料底板上依次粘贴样品垫、荧光微球探针结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述荧光微球探针结合垫上包被了ZEN单克隆抗体的荧光微球标记物；所述硝酸纤维素膜上依次包被有羊抗鼠IgG抗体和ZEN的完全抗原ZEN-BSA，以羊抗鼠IgG抗体为质控线，以完全抗原ZEN-BSA为测试线。

2. 权利要求1所述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）制备ZEN的单抗Ab1-1G4；

（2）通过EDC和NHS介导的与蛋白表面氨基的酰胺化反应完成抗体的荧光标记；

（3）将步骤（2）制备所得抗ZEN单抗的荧光微球探针包被在结合垫上，将羊抗鼠IgG抗体和ZEN的完全抗原ZEN-BSA分别包被在硝酸纤维素膜上，羊抗鼠IgG抗体作为质控线，ZEN的完全抗原ZEN-BSA作为测试线；

（4）将样品垫、荧光微球探针结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸由一端依次粘贴在塑料底板上，即得到所需镉离子胶体金免疫层析快速检测试纸条；

（5）将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸由一端依次粘贴在塑料底板上，即得到所需ZEN免疫荧光快速检测试纸条；

其中，步骤（1）中分泌Ab1-1G4的杂交瘤细胞1G4G10D3于2012年4月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国.武汉.武汉大学，保藏编号CCTCC NO：C201237 。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于所述步骤（1）中，每ml的荧光微球探针标记30~50ug的抗ZEN单抗。

4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于所述步骤（3）中，把标记好荧光微球探针的ZEN单抗溶液按1~4μl/cm的喷量喷在已处理好的结合垫上，37℃抽风烘干，时间为12~24h。

5.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于所述步骤（3）中，羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.8~1.2mg/ml，ZEN的完全抗原ZEN-BSA的浓度为1.2~1.8mg/ml。

6.权利要求1所述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）待测样品处理：食品、谷物和饲料经粉碎后使其90%通过20目网筛；

称取5g加到100mL具塞锥形瓶中，加入25mL 70%甲醇/水溶液（v:v,70:30）；

震荡器提取10min，提取液通过快速滤纸过滤；

取1mL滤液，加4mL蒸馏水稀释，摇匀，为试样液；

（2）将上述待测上样溶液滴加于权利要求1所述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条的样品垫上，加样后开始计时；

（3）加样5-10min后，观察T线和C线颜色的不同，从而判断得出待测样品中是否含有玉米赤霉烯酮。

7.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于所述步骤（1）中的待测样品为系列浓度的ZEN标准液，食品、谷物或饲料提取液。

8.权利要求1所述玉米赤霉烯酮免疫荧光快速检测试纸条在检测食品、谷物或饲料中是否含有玉米赤霉烯酮的应用。