[发明专利]Celligen310生物反应器制备人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺

说明书

1.发明领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Celligen310)生物反应器制备人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺。 

2.发明背景 

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种人兽共患传染病，是世界上病死率最高的疾病，一般被携带病毒的动物咬伤后感染。一旦发病，死亡率为100％。狂犬病在世界范围内广泛分布，不同种族的人群对狂犬病均有普遍易感性，流行区域以亚洲、非洲和拉丁美洲为主。我国仅次于印度，为世界第二发病率高的国家。近年米，我国狂犬病疫情一直呈上升趋势，病死数高居我国37种法定报告传染病首位。幸运的是适当接种狂犬病疫苗对狂犬病也有近乎100％的保护率，提高人群和动物的疫苗接种率对控制狂犬病流行具有决定性意义。在条件许可的情况下对人群的普遍性预防性接种，可望避免由狂犬病引其的人员死亡。 

目前我国预防接种的疫苗绝大部分是由动物细胞作为基质生产而来。这些疫苗普遍存在局部过敏反应，有时会出现发热等全身性副作用，甚至有潜在的致肿瘤危险。尽管狂犬病是高致死性疾病、疫苗接种为唯一的控制方法、对于被咬伤人员疫苗接种没有绝对的禁忌症。但是世界卫生组织不推 荐人们在被咬伤前使用这些疫苗，推荐使用人二倍体细胞培养的疫苗作为暴露前的预防接种疫苗。 

人二倍体细胞狂犬疫苗(human diploid cell rabies vaccine，HDCV)在所有现行使用的疫苗中已公认最为安全和有效。临床药理试验证明HDCV可以迅速诱导人体特异性抗体的产生。HDCV是国际狂犬疫苗的金标准，是评价所有人用狂犬疫苗的标准疫苗。适应于暴露前免疫，初次免疫和定期加强免疫，暴露后预防接种。 

3.发明内容

本发明公开一种Celligen310生物反应器制备人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺，采用Celligen310生物反应器培养人二倍体细胞，接种狂犬病毒PM毒株毒种，经过接种、培养、收集病毒滤液，再经过灭活、浓缩、纯化，检定合格后制成品疫苗。 

本发明的优点在于使用人二倍体细胞作为基质细胞，制备的疫苗与传统动物源性基质细胞制备疫苗比较比较，后续纯化制备工艺简单，疫苗产品具有更大的安全性。使用Celligen310生物反应器制备疫苗，与传统方法比较成本较低，更容易工业化生产。 

具体的，本发明涉及了一种Celligen310生物反应器制备人二倍体细胞狂犬病疫苗的制备方法，其包括如下步骤：1)复苏培养人二倍体细胞为产毒细胞；2)PM株病毒种子制备，建立适应于二倍体细胞的PM株病毒种子， 确认其免疫、遗传和增殖特性；3)Celligen310生物反应器扩增培养人二倍体细胞，接种、培养以及收获病毒原液；4)将病毒原液进行灭活、除菌、浓缩和纯化；以及5)加入保护液，并检定合格后制备成品疫苗。 

本发明所述的制备工艺，产品质量标准以2010年《中国药典》第三部狂犬病疫苗规程质量标准为基础。疫苗主要技术指标：病毒滴度≥7.0lgLD50/mL；疫苗免疫剂量：0.5mL/人；抗生素残留量：≤50ng/剂；牛血清残留量：≤50ng/剂；热原：≤50EU/mL；疫苗pH：7.6～7.8热稳定性：符合2010年药典第三部标准，合格；疫苗效力：≥2.5IU/剂；无菌检查：符合2010年药典第三部标准，合格。支原体检查：符合2010年药典第三部标准，合格；异常毒性试验：符合2010年药典第三部标准，合格。鉴别试验：合格。 

4.附图说明

图1为Celligen310生物反应器制备人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺流程图。 

5.具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。本实施例仅仅用于对本发明的说明，不构成对本发明的限制。