[发明专利]磷酸酯化龙眼肉多糖及其合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种磷酸酯化龙眼肉多糖及其合成方法。 

背景技术

糖基磷酸酯类化合物，特别是葡萄糖基磷酸酯类化合物的合成及其生物活性的研究早有报道。研究表明多糖的磷酸酯类衍生物具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌和免疫调节剂等生物活性。果糖、葡萄糖等单糖本身不具有抗肿瘤、抗病毒等生物活性，但对其磷酯化后就具有这些活性。Hayachi等发现葡萄糖基磷酸酯衍生物具有抗肿瘤、抗病毒等生物活性，并作为药物而应用于临床。磷酸果糖可用于治疗重型脑梗死、拮抗庆大霉素肾毒性以及用于辅助治疗心律失常等。陈茹玉等合成的N,N-二(2-氯乙基)果糖基磷酰胺酯的抗肿瘤活性实验结果表明该类化合物对L1210细胞和S-180腹水癌有一定的抑制作用。 

在糖基上引入磷酸根，可使一些本无活性的糖类化合物具有了活性，并能提高某些多糖、寡糖的生物活性。因此就很有必要研究各种寡糖、多糖及其类似物的磷酸酯的生理功能，以期能够找到磷酰化后产物的生理功能的一些规律，研究磷酸基团在生理功能中的作用，为设计生理活性更好的磷酸酯衍生物提供参考数据。 

由于从自然界分离得到的寡糖或多糖的磷酸酯数量有限，种类也不多，影响对糖的磷酸酯的生物活性及磷酸酯在生物体内的作用进行系统的研究，为了深入研究糖的磷酸酯衍生物，转向了人工合成。但用人工合成磷酸酯化龙眼肉多糖的方法尚未见有报道。 

发明内容

本发明目的是提供一种磷酸酯化龙眼肉多糖及其合成方法，它能够用人工合成的方法制备磷酸酯化龙眼肉多糖。 

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种磷酸酯化龙眼肉多糖，该多糖由葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖醛酸、果糖和山梨糖组成，磷酸酯化龙眼肉多糖的分子量为112518.5。 

该多糖的结构片段为： 

所述的磷酸酯化龙眼肉多糖的合成方法，包括如下步骤： 

（1）龙眼肉多糖分离提取 

将龙眼干果剥壳去核，按质量体积比为龙眼肉：蒸馏水=1：4，采用热水提取，控制温度在90℃下提取4小时，过滤，滤渣重复提取3次，合并滤液，65℃下旋转蒸发仪浓缩，待提取液浓缩至粘稠状，趁热缓慢倒入4倍于其体积的95%乙醇中，密封静置，醇沉物为龙眼肉粗多糖， 

（2）除蛋白及色素 

称取一定量的龙眼肉粗多糖用蒸馏水配制成5.00g/ml溶液，往溶液中加入木瓜蛋白酶，使其终浓度为1g/ml，然后置于50℃恒温水浴锅中保温3h，最后于100℃灭酶5min，4000r/min离心15min，去掉沉淀物，合并上清液，即得去除蛋白多糖溶液，将已去除蛋白的粗龙眼肉多糖配成5.00g/ml的水溶液，滴加30%H₂O₂去除色素，用量为多糖溶液体积的15.00%，用0.10mol/L的NaOH溶液调节多糖液的pH值为8.0，于45℃水浴中反应，每隔30min检测一次pH值，确保反应过程中反应液的pH值维持在8.0，4h后终止反应，冷至室温，用0.10mol/L盐酸调回中性，加入氯化钠，使其浓度为5.00g/ml，然后缓慢加入无水乙醇，使其含量达35～40%，在冰箱中4℃放置过夜，次日离心收集沉淀，经无水乙醇、丙酮反复洗涤后，45℃减压干燥，得到去除蛋白及色素后的龙眼肉粗多糖， 

（3）去除蛋白及色素后的龙眼肉粗多糖二乙胺基乙基纤维素柱分级纯化 

二乙胺基乙基纤维素作为柱填料，柱参数为：Φ2.5cm×40cm，分别用双馏水、0.125mol/L的NaCl、0.30mol/L的NaOH溶液作为洗脱液进行洗脱，控制流速6s/滴，每10ml收集一管，用改良的苯酚-硫酸法跟踪检测，合并正态峰的收集液，50℃减压浓缩，浓缩液透析48小时后再浓缩、干燥，得到氯化钠馏分的龙眼肉多糖， 

（4）氯化钠流分的龙眼肉多糖丙烯葡聚糖凝胶S-300HR柱纯化 

取氯化钠流分的龙眼肉多糖，用Φ2.0cm×40cm的丙烯葡聚糖凝胶S-300HR柱作进一步纯化，洗脱液为蒸馏水，洗脱条件为1滴/4s，洗脱流分分别进行减压浓缩后进行醇沉，离心，沉淀 真空干燥，取第一个洗脱流分干燥后的多糖，命名为龙眼肉多糖A，并用龙眼肉多糖A进行磷酸酯化， 

（5）磷酸酯化龙眼肉多糖的合成