[发明专利]磷酸酯化龙眼肉多糖及其合成方法

权利要求书

1.一种磷酸酯化龙眼肉多糖，其特征在于，该多糖由葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖醛酸、果糖和山梨糖组成，磷酸酯化龙眼肉多糖的分子量为112518.5。

2.一种磷酸酯化龙眼肉多糖，其特征在于，该多糖的结构片段为：

3.如权利要求1所述的磷酸酯化龙眼肉多糖的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）龙眼肉多糖分离提取

将龙眼干果剥壳去核，按质量体积比为龙眼肉：蒸馏水=1：4，采用热水提取，控制温度在90℃下提取4小时，过滤，滤渣重复提取3次，合并滤液，65℃下旋转蒸发仪减压浓缩，待提取液浓缩至粘稠状，趁热缓慢倒入4倍于其体积的95%乙醇中，密封静置，醇沉物为龙眼肉粗多糖，

（2）除蛋白及色素

称取一定量的龙眼肉粗多糖用蒸馏水配制成5.00g/ml溶液，往溶液中加入木瓜蛋白酶，使其终浓度为1g/ml，然后置于50℃恒温水浴锅中保温3h，最后于100℃灭酶5min，4000r/min离心15min，去掉沉淀物，合并上清液，即得去除蛋白多糖溶液，将已去除蛋白的粗龙眼肉多糖配成5.00g/ml的水溶液，滴加30%H₂O₂去除色素，用量为多糖溶液体积的15.00%，用0.10mol/L的NaOH溶液调节多糖液的pH值为8.0，于45℃水浴中反应，每隔30min检测一次pH值，确保反应过程中反应液的pH值维持在8.0，4h后终止反应，冷至室温，用0.10mol/L盐酸调回中性，加入氯化钠，使其浓度为5.00g/ml，然后缓慢加入无水乙醇，使其含量达35～40%，在冰箱中4℃放置过夜，次日离心收集沉淀，经无水乙醇、丙酮反复洗涤后，45℃减压干燥，得到去除蛋白及色素后的龙眼肉粗多糖，

（3）去除蛋白及色素后的龙眼肉粗多糖二乙胺基乙基纤维素柱分级纯化

用二乙胺基乙基纤维素作为柱填料，柱参数为：Φ2.5cm×40cm，分别用双馏水、0.125mol/L的NaCl、0.30mol/L的NaOH溶液作为洗脱液进行洗脱，控制流速6s/滴，每10ml收集一管，用改良的苯酚-硫酸法跟踪检测，合并正态峰的收集液，50℃减压浓缩，浓缩液透析48小时后再浓缩、干燥，得到氯化钠流分的龙眼肉多糖，

（4）氯化钠流分的龙眼肉多糖丙烯葡聚糖凝胶S-300HR柱纯化

取氯化钠流分的龙眼肉多糖，用Φ2.0cm×40cm的丙烯葡聚糖凝胶S-300HR柱作进一步纯化，洗脱液为蒸馏水，洗脱条件为1滴/4s，洗脱流分分别进行减压浓缩后进行醇沉，离心，沉淀真空干燥，取第一个洗脱流分干燥后的多糖，命名为龙眼肉多糖A，并用龙眼肉多糖A进行磷酸酯化，

（5）磷酸酯化龙眼肉多糖的合成

配制0.025g/ml的龙眼肉多糖A溶液，取1.00ml磷酸酯化试剂POCl₃，加入3ml的吡啶，0℃反应15min后，缓慢加入0.025g/ml的龙眼肉多糖A溶液20.0ml，在0℃下进行反应60min，再加入浓度为10mol/L的NaOH溶液调至pH=7.0，再透析24h，除去游离的磷、盐和吡啶，透析结束后，倾出溶液，加入1.5倍于倾出溶液的无水乙醇，醇沉，3000r/min离心10min，取沉淀物，再用90%的乙醇洗涤沉淀物3次，45℃减压干燥即得磷酸酯化龙眼肉多糖。