[发明专利]从荷叶中分离芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种从荷叶中分离芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的方法。 

背景技术

荷叶为睡莲植物莲( Nelumbo nucifera Gaertn) 的干燥叶, 又名莲叶、藕叶，在我国大部分地区多有种植，广泛应用于食物及药物，为卫生部规定的第二批“既是食品又是药品”的品种。传统医学认为, 荷叶味苦, 平, 归肝、脾、胃经，具有清暑化湿、升发清阳、凉血止血之功效，据《本草纲目》记载“荷叶服之, 令人瘦劣”、“生发元气, 裨助脾胃，涩精浊，散瘀血，消肿痛，发痘疮”。 现代医学研究证明, 荷叶中含有大量的黄酮类化合物, 具有降血脂、治疗动脉粥样硬化、抗有丝分裂、抑菌等功效。 

目前，荷叶中黄酮含量的测定已有报道，多采用紫外分光广度法测定总黄酮或者高效液相色谱法测定槲皮素、芦丁等黄酮类化合物含量。 

荷叶中具一定含量的异槲皮苷，但由于异槲皮苷与芦丁、槲皮素等黄酮类化合物结构相似，常规方法很难有效分离。 

CN100367976（2008-2-13）提供了一种贯叶连翘提取物及制备方法，其中涉及异槲皮苷的峰面积和贯叶连翘提取物的指纹图谱检测方法，然而该方法对于从荷叶中分离并不适用。 

《药物分析杂质》2010，30袁丽春，刘斌，石任兵公开了一种“HPLC法测定不同市售荷叶药材中金丝桃苷和异槲皮苷的含量”，然而该方法为常规分析提纯方法，分离效率不高，并且难以分别将槲皮素、芦丁、金丝桃苷和异槲皮苷分离出来。 

发明内容

本发明的目的是提供一种分离效率高的一种从荷叶中分离芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的方法。 

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种从荷叶中分离芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的方法，包括采用柱层析方法拆分荷叶粉末中的组分，而柱层析用的固定相为C18，流动相A为pH值3.5-4.5的磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，在柱温28-32℃、pH值3.5-4.5的条件下按0.6-0.8ml/min的流速梯度洗脱65-75min；所述梯度洗脱条件为：在0-45min，所述流动相A与流动相B的体积比为（90-95）/（5-10）；在46-55min，所述流动相A与流动相B的体积比为（80-85）/（15-20）；在56-65min，所述流动相A与流动相B的体积比为（68-72）/（28-32）；在66-75min，所述流动相A与流动相B的体积比为（90-95）/（5-10）；分别回收含芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的洗脱液，最后减压蒸馏脱除溶剂后获得芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素。 

芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素分别相差一个葡糖基，固定比例洗脱很难分离，特别是芦丁和异槲皮苷，保留时间非常接近，容易造成混合，通过本发明的上述梯度分离方法，最终实现了有效分离，并且芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的分离效率分别达到98.5%以上，分离效率较高。 

  

作为优选，所述磷酸盐缓冲液为0.15-0.25%的磷酸溶液与8-12%的氢氧化钠溶液混合至pH值3.5-4.5制备而成。

更优选地，所述磷酸盐缓冲液的配制方法为：将0.2%的磷酸溶液滴定至10%的氢氧化钠溶液，在滴定同时通过搅拌加入空气，混合至pH值4.0制备而成。 

作为优选，磷酸盐缓冲液的pH值为4.0。 

作为优选，在0-45min，所述流动相A与流动相B的体积比为92/8。 

作为优选，在46-55min，所述流动相A与流动相B的体积比为82/18。 

作为优选，在56-65min，所述流动相A与流动相B的体积比为70/30。 

作为优选，在66-75min，所述流动相A与流动相B的体积比为92/8。 

作为优选，所述荷叶粉末先用质量分数为75-85%的甲醇溶液溶解并超声28-35min，然后再加75-85%的甲醇溶液溶解后过滤，取滤液作为所述柱层析的待分离液。 

更优选地，所述荷叶粉末先用质量分数为80%的甲醇溶液溶解并超声30min，然后再加80%的甲醇溶液溶解后过滤，取滤液作为所述柱层析的待分离液。 

附图说明

图1是本发明实施例一的色谱图; 

图2是芦丁对照品的色谱图;

图3是金丝桃苷对照品的色谱图；

图4是异槲皮苷对照品的色谱图；

图5是槲皮素对照品的色谱图； 

图中，Ⅰ-芦丁；Ⅱ-金丝桃苷；Ⅲ-异槲皮苷；Ⅳ-槲皮素。