[发明专利]一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法。 

背景技术

大蒜属百科科葱属蔬菜植物，其营养丰富，是很重要的食用和药用植物，因此在我国被广泛栽培种植。大蒜中含有丰富的黄酮类物质，Biljana Bozin（2008）等的研究认为大蒜鳞茎中的总黄酮含量在4.16±0.03到6.99±0.01 μg QE/g之间。大蒜的抗氧化活性与黄酮类物质的含量有显著相关的关系。酚类物质，特别是黄酮，基于它们的抗氧化性能，通常与人类健康联系在一起讨论（Hertog and Katan 1997）。陈玉霞等(2007)认为，蔬菜的抗氧化活性总黄酮含量显著相关，相关系数达到0.7967（P=0.001）。蔬菜的抗氧化活性与总黄酮含量显著相关，而与维生素C含量则没有显著相关性，这也印证了Cao G等（1996）的研究。Naoaki Morihara（2011）等的研究指出，老化大蒜提取物中含有丰富的水溶性高分子半胱氨酰成分，其组成部分能够利用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶和人类中性粒细胞清除超氧阴离子，具有很强的抗氧化能力，另外老化大蒜提取物中水溶性化合物的含量相对较高，油溶性化合物含量低，同时此老化大蒜也含有丰富的s-烯丙基半胱氨酸以及溶于水的含硫化合物；Horie 等（1992）的研究表明，老化大蒜的组成部分能够保护细胞膜不受脂质过氧化反应的损害；而Brenya Griffin和Michael Selassie（2000）的文章则指出，老化大蒜的抗氧化活性已得到证明，具有延缓衰老的性能； Stephanie A. Dillon等（2003）的研究表明，老化大蒜能清除超氧阴离子和减少脂质过氧化物的形成，是一种有效的抗氧化剂，同时，老化大蒜提取液也具有铜离子螯合的能力，因此，大蒜在预防动脉粥样硬化疾病的发展和产生中发挥着一定的作用。Borek Carmia（2001）指出，将新鲜大蒜提取物经过延长提取处理后，得到的老化大蒜含有抗氧化性的生物化学物质，可以阻止氧化性损伤的产生。老化大蒜通过清除活性氧（ROS）发挥抗氧化活性，增强细胞抗氧化酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧酶的活性，增加细胞中谷胱甘肽的含量。老化大蒜可以抑制脂质过氧化反应，在延缓脑衰老，增强记忆，延长寿命方面发挥着重要的作用。老化大蒜可以阻止由阿霉素引起的心脏中毒和肝脏的碳中毒，能够治疗由氧化性损伤引起的疾病。 

但是，由于黄酮类物为酚类物质的二级结构，分子量很低（Boca Raton et al. 1990），利用有机溶剂很难有效提取出新鲜大蒜鳞茎中的黄酮类物质，因此，目前急需寻找出有效提取出大蒜鳞茎中黄酮类物质的方法。 

发明内容

本发明是为了解决上述技术背景的不足，提供一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其通过对大蒜鳞茎进行老化处理，可大大提高大蒜鳞茎中总黄酮的提取效率，有效提取出大蒜鳞茎中的黄酮类物质。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤： 

（1）以大蒜鳞茎为材料，以蒸馏水为提取剂，选取液料比，老化时间和老化温度三个因素为自变量，分别设计不同的水平，以总黄酮含量为因变量，根据Box-Benhnken模型，得到响应面试验设计；

（2）根据响应面试验设计组合，进行总黄酮含量测定，利用响应面分析软件，进行数据分析；

（3）根据响应面分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的液料比、老化时间和老化温度组合。

所述步骤（1）称取的去皮后的大蒜鳞茎，切成薄片，置于试管中，再分别加入蒸馏水，密封，放入相应温度的恒温水浴锅中老化处理，处理4000 r/min离心10 min，转移上清至离心管中，－20℃贮存备用，其中液料比(mL/g)的为1:1、2:1、3:1；老化时间的为3d、12d、21d；老化温度的为68℃、70℃、72℃。 

所述步骤（2）鳞茎中总黄酮含量的测定方法为：吸取待测提取液1 mL，加入0.5 mol/L 的NaNO₂溶液200 μL，静置5 min，再加入0.3 mol/L的Al(NO₃)₃溶液200 μL，同样静置5 min，最后加入1 mol/L的NaOH溶液1 mL，室温避光反应10 min后，在510 nm波长处测吸光度，根据芦丁标准曲线方程求出提取液中总黄酮的质量浓度(mg rutin DW/g，(rutin equivalent)表示芦丁效物)。