[发明专利]一种千山活血膏的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，确切地说，涉及一种千山活血膏中药药物质量的控制方法，特别是千山活血膏制剂组方三七药材中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1三种成分高效液相色谱含量测定方法。

背景技术

千山活血膏是由土鳖虫、大黄、三七、延胡索、血竭、续断、黄柏、乳香、没药、儿茶、细辛、千年健、山慈姑、泽泻、羚羊角、木香、白及、白芷、桂枝、羌活20味药组成，收载于地方标准WS-10415(ZD-0415)-2002，具有活血化瘀、舒筋活络、消肿止痛的功效，用于肌肤、关节肿胀、疼痛、活动不利以及跌打损伤，腰、膝部骨性关节炎等症。

千山活血膏原质量标准对血竭、三七进行了薄层色谱的鉴别，对三七中的人皂皂苷Rg1进行了含量测定，检测指标少，难以全面控制产品质量，特别是三七中所含的人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1、三七皂苷均为四环三萜类皂苷，在紫外区为末端吸收，与一些常用的有机溶剂的紫外吸收波长接近，影响测定，使用紫外低波长检测，会给测定带来一定困难，影响含量测定的准确性和重现性。

蒸发光闪射检测器(ELSD)是一种新型通用检测器，其信号响应与被测物的质量成正比，而不依赖于被测物的光学特性及官能团，理论上可用于挥发性低于流动相的任何组分的检测。它对无紫外吸收或为紫外末端吸收的物质如糖类、皂苷类、甾类等有较好的响应。ELSD消除了溶剂的干扰和因温度变化引起的基线漂移，即使用梯度洗脱也不会产生基线漂移。ELSD的响应不依赖样品的光学性质，只要样品的挥发性低于流动相即可被检测，尤其适用于流动相有紫外吸收干扰或梯度洗脱时基线漂移影响的情况，克服了传统检测方法的不足，已经越来越多的应用于高效液相色谱中。蒸发光散射检测器(ELSD)最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点，不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，在低温下也能使用。蒸发光散射检测器基线噪音小，不受梯度影响，峰形尖锐，杂质峰很少。而紫外检测器基线受梯度影响，在分析过程中基线漂移较大。三七中皂苷类成分的分析常使用较低的紫外检测波长(203nm)，该波段为末端吸收，噪音信号很大，难以获得满意的结果。ELSD检测器作为一种通用型检测器，仅对不挥发被分析物产生信号，其信号响应值仅取决于被分析物质颗粒的大小和数量，不存在紫外末端吸收的问题。且对流动相的变化不敏感，即使在梯度洗脱时基线也很平稳。通过调节ELSD检测器的漂移管温度与载气流速，可以使基线噪音最小，响应值相对最高，从而获得好的色谱图。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的千山活血膏的质量控制方法。

本发明通过如下技术方案实现

本发明的千山活血膏质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定方法：

鉴别包括如下方法：

(1)取本品5g，加乙醇10ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，取滤液，作为供试品溶液。另取血竭对照药材0.1g，加乙醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

(2)取本品10g，加水70ml，加热煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液加乙醚30ml振摇提取，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，加甲醇20ml，回流提取1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中。在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。

含量测定包括如下方法：