[发明专利]养血清脑颗粒的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医药、化学领域，具体涉及现代中药产品养血清脑颗粒中化学成分的检测方法。

背景技术

养血清脑颗粒是由当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛11味中药组成的复方制剂，具有养血平肝、活络止痛的功效，主要用于治疗血虚肝亢所致的头痛、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等。是受国家重点保护的中药品种。

养血清脑颗粒虽然临床疗效确切，但对于该制剂的物质基础研究有待深入：目前文献中最多只定性了养血清脑颗粒中14种成分(李文博,韩建平,高钧,等.养血清脑颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究.分析化学,2011,39(3):387-391)，对于11味药的大复方，其基本的物质基础有待进一步研究，以进一步明确该制剂的组成成分。此外，对于养血清脑颗粒的质量控制有待完善：目前国家标准(YBZ29552005-2009Z)仅对芍药苷一个成分进行质量控制，不能实现多味药材多成分质量的同时控制。

为更加全面控制养血清脑颗粒质量，建立满足中药现代化的质量控制标准，需要一种可以同时定性养血清脑颗粒多种化学成分，并定量养血清脑颗粒中多种指标成分的分析方法。

发明内容

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种检测养血清脑颗粒中多种化学成分的方法。

根据本发明的养血清脑颗粒高效液相色谱检测方法，检测样品采用10%~50%的甲醇提取，色谱条件为采用C₁₈色谱柱，流动相为磷酸溶液-乙腈，检测器为二极管阵列检测器。

在高效液相色谱-质谱/质谱定性分析制剂的化学成分的基础上采用高效液相色谱定量分析制剂的指标成分。

根据本发明实施方式之一，检测样品采用25%甲醇超声提取。发明人经试验证实，上述提取条件有效成分提取效率最高。

根据本发明的实施方式之一，色谱流动相A相为0.01%~0.05%磷酸溶液，B相为乙腈。优选地，色谱流动相A相为0.02%磷酸溶液，B相为乙腈，梯度洗脱方法为：

0～10min，5%B相→10%B相；

10～15min，10%B相→12%B相；

15～25min，12%B相→15%B相；

25～35min，15%B相→18%B相；

35～40min，18%B相→19%B相；

40～43min，19%B相。

根据本发明的另一实施方式，色谱流动相流速为0.5-1.5mL/min，优选地，流动相流速为0.9-1.2mL/min。

根据本发明的再一实施方式，柱温为25~35℃。优选地，柱温为30℃。发明人考察了柱温(不控温、25℃、30℃、35℃)对分离效果的影响使用，结果表明柱温30℃的情况下，制剂中待测组分峰形对称，分离度高且分析结果稳定。

根据本发明实施方式之一，色谱进样量为2.5~25μL。

根据本发明实施方式之一，采用二极管阵列检测器变波长扫描，色谱检测器波长为210-350nm。优选地，色谱检测器波长依次选择为280nm、320nm和230nm。

实验证明：没食子酸和原儿茶酸最佳吸收波长为280nm，绿原酸，咖啡酸，阿魏酸最佳吸收波长为320nm，芍药内酯苷和芍药苷最佳吸收波长为230nm。故采用二极管阵列检测器(DAD)变波长扫描,在一次分析中可以实现多个成分在最佳波长的检测。

根据本发明实施方式之一，在高效液相色谱检测之前，还进一步包括采用质谱对养血清脑颗粒中的化学成分进行检测的步骤，检测条件为：离子源为ESI源，喷雾电压设为4kV，鞘气压力为35psi，辅助N₂流速为5L/min，加热毛细管温度为300℃，源内CID为10V，正负离子全扫m/z：100-1200。

根据本发明的检测方法，没食子酸，原儿茶酸，绿原酸，咖啡酸，阿魏酸，芍药苷，芍药内酯苷的含量测定结果分别为0.376-0.434mg·g^-1、0.094-0.137mg·g^-1、0.611-0.871mg·g^-1、0.113-0.149mg·g^-1、0.484-2.194mg·g^-1、4.139-5.543mg·g^-1和0.261-0.326mg·g^-1。