[发明专利]一种叶酸偶联抗体药物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种FOLATE-GSH-IgG偶联物，其结构如式（I）、（II）或（III）所示：

其中：

FOLATE表征叶酸或叶酸类似物，所述的叶酸类似物为Methotrexate、Tetrahydrofolate或Dihydrofolate；

GSH表征谷胱甘肽或具有游离的巯基（-SH）及氨基（-NH₂）的化合物，所述的化合物选自Cysteamine，Cysteine；

式（I）和式（II）中IgG代表动物来源的IgG、人源IgG、重组人源IgG或上述IgG的Fc段，或是经还原得到的IgG半抗体或重链；式（III）中IgG代表具有反应活性巯基（-SH）的动物来源的IgG、人源IgG或重组人源IgG的半抗体或IgG重链；

式（I）中，R1选自如下的基团：

-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、

式（II）中，R2选自如下的基团：

式（III）中，R3选自如下的基团：

2.根据权利要求1所述的FOLATE-GSH-IgG偶联物，其特征在于,所述的IgG为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

3.根据权利要求1所述的FOLATE-GSH-IgG偶联物，其特征在于,所述的偶联物具有式（2）-（10）之一所示的结构:

其中，式（1）-(9)中的FOLATE为叶酸，式（10）中的FOLATE为Methotrexate。

4.权利要求1所述的FOLATE-GSH-IgG偶联物的制备方法，包括如下步骤：

（1）、将FOLATE与羟基琥珀酰亚胺（N-hydroxysuccinimide，NHS）反应生成活化的NHS-FOLATE；

（2）、将NHS-FOLATE与GSH反应生成FOLATE-GSH，两者通过酰胺键相连；

（3）、对IgGN-末端的氨基进行活化，反应式如下所示：

活化连接物具有类似R^aCOR^b的结构，R^a为离去基团，R^b含有与GSH分子中游离巯基反应的基团，所述的活化连接物选自Sulfo-LC-SPDP (sulfosuccinimidyl6-[3′(2-pyridyldithiol)-propionamido]hexanoate)、LC-SPDP(succinimidyl6-[3′(2-pyridyldithiol)-propionamido]hexanoate)、SMPT(4-Succinimidyloxycarbonyl-methyl-α-[2-pyridyldithiol]toluene)、Sulfo-LC-SMPT(4-Sulfosuccinimidyl-6-methyl-α-(2-pyridyldithiol)toluamido]hexanoate))、Sulfo-SMCC(Sulfosuccinimidyl 4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate)、SM(PEG)n NHS-PEG-Maleimide Crosslinkers、SMCC(Succinimidyl4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate)、LC-SMCC(Succinimidyl-4-[N-Maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxy-[6-amidocaproate])、Sulfo-EMCS([N-e-Maleimidocaproyloxy]sulfosuccinimide ester)、EMCS([N-ε-Maleimidocaproyloxy]succinimide ester)、Sulfo-GMBS(N-[γ-Maleimidobutyryloxy]sulfosuccinimide ester)、GMBS(N-[γ-Maleimidobutyryloxy]succinimide ester)、Sulfo-KMUS(N-[κ-Maleimidoundecanoyloxy]sulfosuccinimide ester)、Sulfo-MBS(m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysulfosuccinimide ester)、MBS(m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)、Sulfo-SMPB(Sulfosuccinimidyl 4-[p-maleimidophenyl]butyrate)、SMPB(Succinimidyl4-[p-maleimidophenyl]butyrate)、AMAS N-(α-Maleimidoacetoxy)succinimideester)、BMPS(N-[β-Maleimidopropyloxy]succinimide ester)、SMPH(Succinimidyl-6-[β-maleimidopropionamido]hexanoate)或其他具有能与游离巯基反应的基团，反应后形成具有如式（VI）或（VII）所表征的IgG氨基端活化产物：

（4）、将IgG氨基端的活化产物与FOLATE-GSH偶联后，生成最终的FOLATE-GSH-IgG产物，其结构如式（I）或式（II）所示。