[发明专利]一种检测急性心梗的试纸、试纸制备及应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫诊断试剂领域，具体为涉及一种检测急性心梗的试纸、试纸制备及应用方法。

背景技术

随着我国人口老龄化进程的加剧，急性心肌梗塞已成为危害中国的重大疾病。世界卫生组织指出全球每年有850万人死于急性心肌梗塞。在我国，急性心肌梗塞每年患者为2千万人，而有100万人被急性心肌梗塞夺去生命。因而急性心肌梗塞已经成为危害国人健康的重大疾病。治疗显示，急性心肌梗塞发病后3小时内是治疗的至关重要时间。只有对心肌梗塞患者进行早预防、早发现、早救治，才能最大程度挽救患者生命,最大程度改善患者预后。

寻找早期心肌损伤标志物是早期诊断心肌梗塞的关键。目前研究表明：人肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白I可以疾病发作后可释放到外周血，可作为心肌梗塞诊断的特异性指标。

目前，国内检测心肌梗塞主要免疫学方法有酶联免疫吸附试验法(ELISA)和金标免疫试纸条。酶联免疫吸附试验法涉及加样、温浴、洗涤、显色、终止等多个步骤，至少需要3小时，另外,需要在检验科或中心实验室完成，因而不可能在急性心肌梗塞发病后病人家庭，急救车展开。另外酶联免疫吸附试验法灵敏度只能达到10ng/ml,如果要对10ng/ml以下的物质进行检测，就会产生假阴性的结果，即漏检。免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物的一种的免疫技术。相比之下，胶体金技术的敏感性比酶联免疫吸附试验法更差，只能达到50ng/ml，要对人肌红蛋白、肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶的微量检测几乎是不可能的，另外目前国内胶体金技术尚属于起步阶段，基本上不能对上述指标的定量。

鉴于以上特征，目前国内乃至世界在诊断急性心肌梗塞上迫切需要建立一个能够及时、高敏感性、定量检测系统，并将上述检测系统用于急性心肌梗塞产品的开发。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷和问题，本发明实施例的目的是提供能用于检测急性心梗的一种检测急性心梗的试纸、试纸制备及应用方法。

为了达到上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：一种检测急性心梗的试纸，包括底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；其中，结合垫包被有葡聚糖-抗体-荧光素混合标记物；层析膜上具有一条检测带和一条质控带，检测带上固定有单克隆抗体；质控带固定有能与葡聚糖-抗体-荧光素混合标记物特异结合的兔抗鼠IgG抗体。

本发明还提供一种检测急性心梗的试纸制备方法，包含以下步骤：

（1）用稀释液将葡聚糖-抗体-荧光素混合标记物稀释到浓度至0.01-0.03mg/ml范围内，然后将结合垫浸泡在稀释液中，经过烘干或者真空冷冻干燥后，再装配到试纸条底板上；稀释液的组成为：pH7.4 0.01M的PBS缓冲液中加入质量百分比0.1% NaN3、质量百分比1% BSA。

（2）在层析膜上设置两条带，一条检测带和一条质控带；检测带上固定单克隆抗体,所述克隆抗体为抗肌红蛋白、肌钙蛋白I和肌酸激酶同工酶单克隆抗体的一种；质控带固定兔抗鼠IgG抗体；

（3）在步骤（2）的层析膜的一侧贴上样品吸收垫和结合垫，另一侧贴上吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜的检测带、层析膜的质控带和吸水垫依次排布。

本发明还提供一种检测急性心梗的试纸应用方法，包含以下步骤：

（1）在样品吸收垫上加入待测血清样品；在毛细作用下，样品液向吸水垫一端泳动，在结合垫处与葡聚糖-抗体-荧光素混合标记物形成免疫复合物，再进一步泳动，免疫复合物与检测带处的单克隆抗体结合形成类似双抗体夹心的免疫复合物，剩余的荧光标记抗体移动至控制线反应形成条带，为阳性结果；

（2）通过荧光检测装置检测；

（3）结果的判断：检测带不显示，质控带显示条带，表明试纸条有效，待测样品不含所测抗原；检测带显示条带，质控带显示条带，表明待测样品含有所测抗原；检测带不显示，质控带不显示，表明试纸条无效；检测带显示条带，质控带不显示，表明试纸条无效。