[发明专利]基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微方法和装置

权利要求书

1.一种基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)激光光束经位相编码后转换为圆偏振光；

2)将所述圆偏振光通过显微物镜聚焦到待测样品上形成空心聚焦光斑并激发荧光；

3)对所述待测样品的表面进行扫描并收集激发荧光，获取不同位置的光强度信息，并计算得到相应的显微图像。

2.如权利要求1所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微方法，其特征在于，所述步骤1)中的位相编码为0～2π涡旋位相编码。

3.如权利要求2所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微方法，其特征在于，所述显微物镜的数值孔径NA＝0.95～1.4。

4.如权利要求3所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微方法，其特征在于，所述显微物镜的数值孔径NA＝1.4。

5.如权利要求1所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微方法，其特征在于，对所述步骤3)的光强度信息进行反卷积运算。

6.一种基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微装置，包括激光器和放置待测样品的样品台，其特征在于，还包括：沿所述激光器的光路依次布置的位相编码器、偏振态转换器和用于将光束聚焦到所述待测样品上的显微物镜，所述待测样品发出的激发荧光被显微物镜收集；并设有探测所述显微物镜收集的激发荧光的光强度信息的探测成像系统。

7.如权利要求6所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微装置，其特征在于，所述探测成像系统包括：

用于将所述显微物镜收集的激发荧光进行聚焦的凸透镜；

位于所述激发荧光聚焦的焦点处并用于遮挡理想焦点外荧光散射噪声的针孔；

用于感应穿过所述针孔光强度信号的光电感应器件；

用于集成控制并进行反卷积运算的计算机。

8.如权利要求7所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微装置，其特征在于，所述偏振态转换器由沿所述激光器的光路依次布置的二分之一玻片和四分之一玻片组成。

9.如权利要求7所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微装置，其特征在于，所述显微物镜应为浸没式显微物镜，其浸没液为折射率为1.518的浸没油。

10.如权利要求7所述的基于空心聚焦光斑激发的共聚焦显微装置，其特征在于，所述样品台为二维移动平台，所述偏振态转换器与显微物镜之间设有二维扫描振镜。