[发明专利]一种甘草次酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种高纯度甘草次酸的制备方法。

背景技术

豆科植物甘草是中药中常用的重要药材，1964年荷兰Revers发现甘草提取物对医治胃溃疡有较好疗效；此后又发现甘草有利尿、抗炎、抗溃疡、抗癌、防治病毒性肝炎、高脂血症、艾滋病和增强细胞免疫能力的功效。现代医学研究证明，甘草具有医疗保健功能的主要有效成分是甘草酸，而实际起治疗效果的是甘草次酸。使用甘草次酸治疗相应的疾病,可以更好地实现药物剂量和实际治疗的对应关系，以控制甘草酸类药物所带来的副作用。甘草次酸在工业中也有广泛的应用，主要用于合成天然防腐剂、天然增色剂、天然增稠剂和防晒养护品等。甘草次酸不仅具有重要的医学保健功能，而且在化工行业上也逐步得到了广泛的应用。因而，对其提取方法的研究正方兴未艾。通常可以采用酸碱催化的方法从甘草酸中提取甘草酸得到甘草次酸粗品，接着加入氯仿溶提，再经氧化铝层析或乙醇溶解，最后经活性炭脱色后加水析出结晶制备得到甘草次酸产品，工艺技术复杂，生产量也受到限制。后来发展了酶水解法，即甘草酸经酶水解得到纯的甘草次酸。虽然酶水解法可以得到纯甘草次酸，但制备条件和工艺技术不易实现工业化。

发明内容

本发明的目的在于针对目前在制备甘草次酸过程中所存在的工艺复杂以及纯度不高的问题，提供一种制备高纯度甘草次酸的新方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种甘草次酸的制备方法，采用甘草酸粗品为原料，采用半制备型高效液相色谱法制备高纯度甘草次酸，它包括以下步骤：

（1）甘草酸粗品和5~15%的稀硫酸混合后放入密封微波消解罐中，微波消解15~35分钟后，得到消解产物；

（2）将消解产物用氨水调pH至8-9，加入等体积的有机溶剂进行相分配，等分层清晰后，取下层有机溶剂相，旋转蒸发掉有机溶剂，得到甘草次酸粗品；

（3）用甲醇溶解甘草次酸粗品，采用C18反相硅胶色谱柱，甲醇和水作为流动相，等度/梯度洗脱，经过半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化后，收集到的甘草次酸的纯度高于99.5%。

本发明的有益效果是可选用不同纯度的甘草酸粗品来制备甘草次酸，过程简单、易控制，工艺技术简化，生产成本低，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，总杂质峰小于0.5%，单一杂质峰不超过0.3%。此产品完全符合欧洲药典标准。

附图说明

图1是甘草次酸粗品液相色谱法测定图谱，图2是高纯度甘草次酸液相色谱法测定图谱。

具体实施方式

实施例1

1.取2g甘草粗提物与15%硫酸混合，液固比（ml/g）为20:1，置于密封微波消解罐中，微波消解，20分钟内，升温至160℃，保持15分钟；

2.将消解产物用氨水调pH至8后，加入等体积的乙酸乙酯萃取三次，后合并乙酸乙酯层，旋转蒸发掉乙酸乙酯后，得甘草次酸粗品；

3.将甘草次酸粗品用1ml色谱纯甲醇溶解，采用半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化，色谱柱规格为Φ10×250mm，反相C18硅胶填料为江苏汉邦科技有限公司产品，粒径为10um，上样量10mg，流动相为70%甲醇-水溶液，等度洗脱，流速4ml/min，柱温20℃，收集保留时间在50~55.5min的馏分。采用的紫外光度检测器的检测波长为230nm，经HPLC分析纯度≥99.7%。

实施例2

1.取1g甘草酸单钾盐与5%稀硫酸混合，液固比（ml/g）为20:1，置于密封微波消解罐中，微波消解，20分钟内，升温至160℃，保持10分钟；

2.将消解产物用氨水调pH至9后，加入等体积的丙酮萃取三次，后合并丙酮层，旋转蒸发掉丙酮后，得甘草次酸粗品；

3. 将甘草次酸粗品用1ml色谱纯甲醇溶解，采用半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化，色谱柱规格为Φ10×250mm，反相硅胶C18填料为江苏汉邦科技有限公司产品，粒径为5um，上样量15mg，流动相为80%甲醇-水溶液，等度洗脱，流速4ml/min，柱温25℃，收集保留时间在33~41.5min的馏分。采用的紫外光度检测器的检测波长为230nm，经HPLC分析纯度≥99.5%。

实施例3

1.取1g甘草酸单铵盐与5%稀硫酸混合，液固比（ml/g）为20:1，置于密封微波消解罐中，微波消解，20分钟内，升温至160℃，保持10分钟；

2.将消解产物用氨水调pH至8后，加入等体积的氯仿萃取三次，后合并氯仿层，旋转蒸发掉氯仿后，得甘草次酸粗品；

3. 将甘草次酸粗品用1ml色谱纯甲醇溶解，采用半制备型液相色谱仪进行最后一步的分离纯化，色谱柱规格为Φ10×250mm，反相硅胶C18填料为江苏汉邦科技有限公司产品，粒径为10um，上样量10mg，流动相为甲醇-水溶液，梯度度洗脱条件为，0~25min，甲醇65%~80%；25~50min，甲醇80%~80%，流速4ml/min，柱温30℃，收集保留时间在25~30min的馏分。采用的紫外光度检测器的检测波长为230nm，经HPLC分析纯度≥99.5%。