[发明专利]基于上转换荧光纳米颗粒标记的定量检测克伦特罗的免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种基于上转换荧光纳米颗粒标记的检测克伦特罗的免疫层析试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为吸附纤维层、荧光抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其特征在于：在纤维素膜层上设有用偶联CL的载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，还设有用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述荧光抗体纤维层采用吸附荧光抗体的玻璃纤维棉制成，荧光抗体采用NaYF₄:Yb:Er纳米颗粒标记的CL单克隆抗体或多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述NaYF₄:Yb:Er纳米颗粒是以NaYF₄为基质、Yb³⁺为敏化剂，由Yb和Er共掺杂形成的直径为50-200nm的纳米颗粒。

3.根据权利要求2所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述NaYF₄:Yb:Er纳米颗粒标记的CL单克隆抗体或多克隆抗体由以下方法制备，具体步骤为：

（1）荧光纳米颗粒的表面硅化

将NaYF₄:Yb:Er荧光纳米颗粒分散在质量浓度为10%的乙醇溶液中，在搅拌下加入5ml浓氨水，反应10min，然后加入2ml正硅酸四乙酯，室温反应3h；6000rpm离心5min，水洗后用乙醇分散；

（2）荧光纳米颗粒的表面氨基化

将表面硅化的荧光纳米颗粒加入体积比为3:5的甲醇、丙酮的混合溶液中，经超声波分散，加入5μl的N-(2-氨乙基)-3-氨丙基三甲氧基硅烷，70℃水浴反应1h，6000rpm离心5min，将得到的沉淀用乙醇洗涤，干燥；

（3）CL抗体的标记

将表面经氨基化修饰的NaYF₄:Yb:Er纳米颗粒用PBS缓冲溶液分散，向其中加入质量浓度25%的戊二醛溶液，室温反应3小时，离心洗去多余的戊二醛，然后将反应液分散在PBS缓冲溶液中，加入CL的单克隆抗体或多克隆抗体，4℃反应3小时，经离心洗涤，即得到NaYF₄:Yb:Er纳米颗粒标记的CL单克隆抗体或多克隆抗体，置于PBS缓冲溶液中，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征是：所述吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；吸水材料层用吸水滤纸，支撑层用不吸水的韧性材料；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜；                                                偶联CL的载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。

5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征是：所述隐形检测印迹和隐形对照印迹为平行排列的“︱︱”直线式印迹，或为“十十”字型排列印迹，或为“┬ ┬”字型排列印迹，或为“┴ ┴”字型排列印迹，或为“├├”字型排列印迹，或为“┤┤”字型排列印迹。

6.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征是：在所述吸附纤维层、荧光抗体纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在吸附纤维层与荧光抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向吸附纤维层一侧0.3-0.7cm。