[发明专利]一种放射形土壤杆菌突变株及其制备β-1,3葡聚糖作为鱼虾抗病因子饲料添加剂的方法

权利要求书

1.一种放射形土壤杆菌突变株，其特征在于：该突变株的分类命名为放射形土壤杆菌突变株L-15，学名为Agrobacterium radiobacter (Beijerinck et van Deiden) Cohn mutant strain L-15，保藏编号为cctcc M NO：2012294，保藏日期为2012年7月19日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。

2.根据权利要求1所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于：所述放射形土壤杆菌突变株L-15是将保藏编号为As.1.150的放射形土壤杆菌经过紫外线诱变、Co⁶⁰诱变和等离子束诱变后筛选所得，所述保藏编号为As.1.150的放射形土壤杆菌学名为Agrobacterium radiobacter (Beijerinck et van Deiden) Cohn。

3.根据权利要求2所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于，所述紫外线诱变的操作步骤为：

取对数生长期的保藏编号为As.1.150的放射形土壤杆菌的菌液，以最大致死量的80%-90%的剂量进行紫外线照射，然后在黑暗中培养24小时，再稀释涂于平板筛选培养基，置30℃-35℃中培养48-96小时；

在平板筛选培养基上挑取蓝色菌落，接种在斜面培养基中，置30℃-35℃中培养24-48小时；

再将斜面培养基中的菌株分别接入基本发酵培养基中进行发酵，置于30℃-35℃，以150r/min-200r/min振荡培养48-96小时；

发酵后选用β-1,3葡聚糖产量最高的菌株作为下一步诱变试验的出发菌株。

4.根据权利要求3所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于，所述Co⁶⁰诱变的操作步骤为：

将紫外线诱变所得的出发菌株，用Co⁶⁰照射进行诱变，照射剂量为600-1000GY，照射后的菌液，在黑暗中培养24小时，再稀释涂平板筛选培养基，置30℃-35℃中培养48-96小时；

在平板筛选培养基上挑取蓝色菌落，接种在斜面培养基中，置30℃-35℃中培养24-48小时；

再将斜面培养基中的菌株分别接入基本发酵培养基中进行发酵，置于30℃-35℃，以150r/min-200r/min振荡培养48-96小时；

发酵后选出3个β-1,3葡聚糖产量较高的菌株。

5.根据权利要求4所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于，所述等离子束诱变的操作步骤为：

（1） 用无菌生理盐水将Co⁶⁰诱变后选出的菌株洗入烧瓶中，振荡10分钟，得到菌液；

（2） 将菌液稀释至10^-1cfu/ml，取0.2mL，滴在无菌培养皿上，在无菌操作台上吹干，用13mA，20Kev的低能氮离子束轰击，其剂量为10×26×10¹³ ions/cm²~100×26×10¹³ions/cm²；

（3） 轰击后将菌株接入基本发酵培养基中进行发酵，置于30℃-35℃，以150r/min-200r/min振荡培养48-96小时，即得放射形土壤杆菌突变株L-15。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于：所述平板筛选培养基是由质量体积比分别为1%葡萄糖，0.5%酵母膏，0.001%-0.008%苯胺蓝染料和2%琼脂组成，其pH值为7.0-7.8。

7.根据权利要求3-5中任一项所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于：所述斜面培养基是由质量体积比分别为0.3%牛肉膏，0.5%蛋白胨，0.5%氯化钠，0.1%-0.15%玉米浆水解液和2%琼脂组成，其pH值为7.0-7.8。

8.根据权利要求3-5中任一项所述的放射形土壤杆菌突变株，其特征在于：所述基本发酵培养基是由质量体积比分别为4%蔗糖，0.1%磷酸氢二铵，0.1%磷酸二氢钾，0.05%七水硫酸镁，0.005%七水硫酸亚铁，0.1%-0.15%玉米浆水解液，0.002%氯化钴，0.001%硫酸锌和0.001%硫酸锰组成，其pH值为7.0-7.8。