[发明专利]快速检测地沟油的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测地沟油的试剂盒及其检测方法。

背景技术

目前，市场上食用油的质量良莠不齐，一小部分油脂加工生产商为了节约成本、牟取暴利，违法加工提炼地沟油，或是在普通食用油中掺入地沟油来欺骗消费者，这些不法行为给食品安全带来了隐患，严重危害了消费者的健康与利益。

地沟油是质量、卫生极差，过氧化值、酸价、水分、羰基价、丙二醛等指标严重超标的非食用油，一般分为3类：

一是狭义的地沟油，即将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜(通称泔水)经过简单加工、提炼出的油；

二是劣质动物肉类、动物内脏、动物皮脂加工以及提炼后产出的油；

三是用于油炸食品的油使用次数超过规定要求后，再被重复使用或往其中添加一些新油后重新使用的油。

地沟油中的重金属、毒素(如丙烯醛)等严重超标，过氧化值一般高于0.4％，远远超过国家标准0.15％，长期摄入会使细胞功能衰竭，诱发多种疾病，甚至致癌。日本曾发生食用过氧化值为7.5％的劣质油脂而造成集体急性中毒事件。

目前国内对地沟油的鉴别和检测主要是从感官和理化检验两个方面进行。理化检测分别检验水分含量、比重、折光率、皂化值、酸值、羰基值、过氧化值、碘值重金属、脂肪酸相对不饱和度、胆固醇、残留检测、氧化产物等指标。地沟油由于经过水洗、蒸馏、脱色、脱臭等精炼工艺后，或者与普通食用植物油掺兑之后，已经很难用常规的感官分析或者理化指标等进行区分。

目前国内尚缺乏能够有效鉴别地沟油的检测方法。

发明内容

基于此，本发明依据地沟油的加工原料与普通食用油原料存在较大的差异，提供了一种快速检测地沟油的试剂盒及其检测方法。利用试剂盒对地沟油中的基因成分进行检测，通过检测结果判断地沟油的加工原料，从而达到快速检测地沟油的目的。

一种快速检测地沟油的试剂盒，包括：

(1)DNA提取缓冲液

所述DNA提取缓冲液的组成为：十六烷基三甲基溴化胺(简称CTAB)、90～110nmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(简称Tris-HCl)、15～25mmol/L乙二胺四乙酸二钠(简称EDTA₂Na)、1.3～1.5mol/L氯化钠(简称NaCl)、0.09～0.12g/L蛋白酶K；

(2)Taq DNA聚合酶，所述Taq DNA聚合酶的浓度为125IU；

(3)PCR反应液

所述PCR反应液的组成为：2.7～3.3mmol/L氯化镁，0.3～0.5μmol/L引物，0.3～0.5mmol/L的三磷酸脱氧核苷酸；

所述引物为针对动物源性基因序列的通用引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、以及针对植物源性基因序列的通用引物SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；

(4)上样缓冲液

所述上样缓冲液的组成为：2.0～3.0g/L溴酚蓝、350～450g/L蔗糖。

在其中一些实施例中，所述引物还包括针对牛、羊、猪或鸡的线粒体基因序列的引物。

在其中一个实施例中，所述针对牛线粒体基因序列的引物为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。

在其中一个实施例中，所述针对羊线粒体基因序列的引物为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。

在其中一个实施例中，所述针对猪线粒体基因序列的引物为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10。

在其中一个实施例中，所述针对鸡线粒体基因序列的引物为SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12。

在其中一个实施例中，所述引物还包括针对玉米的内源基因序列的引物SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14、针对大豆的内源基因序列的引物SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16、针对大米的内源基因序列的引物SEQ ID NO：17和SEQ IDNO：18、针对花生的内源基因序列的引物SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20或针对油菜籽的内源基因序列的引物SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22。

一种快速检测地沟油的方法，采用上述试剂盒，包括以下步骤：

(1)制备样品DNA