[发明专利]用于CEA定量检测的试剂盒及其制备、使用方法

说明书

技术领域

本发明属于体外临床检验和纳米技术领域，具体地涉及一种用于定量检测癌胚抗原(CEA)的试剂盒、其制备方法以及使用该试剂盒检测CEA的方法。

背景技术

癌胚抗原(Cacinoembryonic antigen，CEA)是一种高度糖基化的分子量为180-220kDa的细胞表面糖蛋白。CEA是一个广谱性的肿瘤标志物，结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等疾病均可高水平的表达。检测体液(血清、胸腔积液、痰液、唾液、精液、尿液、腹水等)CEA的含量对于肿瘤的诊断、预后、术后疗效观察具有重要的临床意义。正常血清CEA参考值为5ng/mL。

1969年，放射免疫分析法最早用于CEA的检测。尽管放射免疫分析法是最常用于抗原检测的一种方法，但是用于标记的放射性元素对操作者身体有很大的伤害。因此，酶联免疫分析法(ELISA)、压电免疫分析法、化学发光分析法、比色法、荧光免疫分析法和脂质体免疫分析法等方法被陆续开发出来。然而，这些方法中的大部分步骤繁琐，或者耗时太长，或者需要复杂昂贵的仪器设备，或者需要高度专业的操作人员，等等。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明所要解决的技术问题是提出一种新的用于CEA定量检测的试剂盒及其制备、使用方法，以解决现有技术无法简单、快速、灵敏、低成本地对CEA进行检测。

(二)技术方案

为解决上述技术问题，本发明的用于CEA定量检测的试剂盒包括如下试剂：偶联有CEA抗体的生物功能化磁纳米复合粒子、酶标记的CEA抗体和化学发光底物。

根据本发明的一种具体实施方式，所述偶联有CEA抗体的生物功能化磁纳米复合粒子由纳米级的磁核与包含各种功能基团的高分子材料复合而成。

根据本发明的一种具体实施方式，所述高分子材料为聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚氯乙烯、二氧化硅、多糖和牛血清白蛋白中的一种或几种。

根据本发明的一种具体实施方式，所述磁核为铁、钴、镍的粉体或氧化物或其合金。

根据本发明的一种具体实施方式，所述化学发光底物包括鲁米诺和过氧化物。

根据本发明的一种具体实施方式，所述酶标记的CEA抗体为CEA的单克隆抗体或多克隆抗体。

根据本发明的一种具体实施方式，所述酶标记的CEA抗体的浓度为300～2000ng/mL。

本发明还提出一种相应的制造用于CEA定量检测的试剂盒的方法，

该方法包括制造偶联有CEA抗体的生物功能化磁纳米复合粒子的步骤，

且该步骤包括如下分步骤：第一步、将生物素化的CEA抗体加入磁珠中，

并摇动反应一段时间，使二者进行偶联形成生物功能化磁纳米复合粒子；第二步、将BSA加入磁珠中再次进行摇动反应以封闭磁珠上未反应的位点；第三步、在磁珠中加入PBS溶液配制成生物功能化磁纳米复合粒子。

根据本发明的一种具体实施方式，在第一步之前，还包括用洗涤液洗涤亲和素修饰的磁珠的步骤。

本发明还提出一种使用试剂盒检测CEA的方法，该方法利用一校准品进行定标，得到CEA浓度的校准曲线，并根据该校准曲线检测样品的CEA浓度，所述校准步骤和检测步骤均包括如下步骤：第一步、利用生物功能化磁纳米复合粒子对校准品或样品中的CEA进行捕获；第二步、利用酶标记的CEA抗体与所述第一步中的捕获的CEA及生物功能化磁纳米复合粒子形成双抗体夹心结构；第三步、在所述双抗体夹心结构中加入所述化学发光底物，然后放入到化学发光检测仪中，读取光强最大值。。

(三)有益效果

本发明将纳米磁珠分离技术、化学发光和酶免疫分析技术结合起来，具有灵敏度高、线性范围宽、特异性高、反应迅速等优点。用本发明的方法开发的CEA检测试剂盒能够灵敏、快速、可靠的检测出CEA的含量，从而为临床上肿瘤的诊断、分期、观察术后疗效及预后提供一个准确的参考值。

附图说明

图1是化学发光强度与时间的关系曲线图(以30ng/mL的CEA为例)；

图2是由校准溶液测得的校准曲线。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。

本发明包括两个方面，一是生物功能化磁纳米复合粒子及其制备方法，二是利用该生物功能化磁纳米复合粒子对CEA的检测方法。